紫外法 多不饱和脂肪酸的测定

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1、GB/T21495—2008/ISO7847:1987动植物油脂具有顺，顺1，4-二烯结构的多不饱和脂肪酸的测定1范围本标准规定了酶法测定动植物油脂中顺，顺l,4-二烯结构多不饱和脂肪酸的方法，实际上就是指具有w3和w6型多不饱和结构的亚油酸（9,12-十八碳二烯酸）和亚麻酸（9,12,15-十八碳三烯酸）系列。其结构是：本标准不适用于油脂中w8和w9型多不饱和脂肪酸及含有支链脂肪酸的测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否

2、可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T15687油脂试样制备(GB/T15687-1995，eqvIS0661:1989)1S05555动植物油脂取样3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1顺,顺1,4-二烯脂肪酸cis,cis1,4-dienefattyacids本标准规定的方法所测定的脂肪酸，以样品的质量分数表示。4原理在室温条件下，样品皂化后产生脂肪酸，具有顺,顺,4-二烯结构的脂肪酸被酶促氧化，产生的氧化酸在最大吸收波长(约235nm)下测定吸光度，同时做样品空白试验，计算样品中多不饱和脂肪酸的含量。5试剂和材料所用试剂均为分

3、析纯，水为蒸馏水或同等纯度的水。5.1正己烷5.2盐酸溶液c(HCl)≈0.5mol/L。5.3氢氧化钾—乙醇溶液[c(KOH)≈0.5mol/L]5.3.1贮备液称取65g氢氧化钾（86%氢氧化钾）溶于约80mL水中，冷却后稀释至100mL。5.3.2稀释液5GB/T21495—2008/ISO7847:1987吸取5mL贮备液(5.3.1)用体积分数为95%的乙醇稀释至100mL。此溶液应临用时现配。5.4硼酸钾缓冲液c(K3BO3)=1.0mol/L(pH=9.0)。称取61.9g硼酸和25.0g氢氧化钾（86%氢氧化钾）加热搅拌溶于约800mL水中，冷却至室温，测定pH，如有

4、必要，可用盐酸或氢氧化钾溶液调pH至9.0，然后用水稀释至1000mL。5.5硼酸钾缓冲液c(K3BO3)=0.2mol/L(pH=9.0)。将200mL1.0mol/L茹的硼酸钾缓冲液（5.4）用水稀释至1000mL，用冰冷却。5.6脂肪氧化酶稀释液5.6.1脂肪氯化酶酶的活力至少为50000U/mg[一个酶的活力单位（U）定义为实验条件下，每分钟可氧化1.2×10-4μmol亚油酸所需的酶量]。在冻干状态下，于-18℃或更低的温度保存时，该酶在数年内均是稳定的。注：低活力的酶制剂会导致结果偏低，过高活力的酶制剂不会比活力在50000U/mg～100000U/mg范围内的酶制剂得到

5、更好的结果。5.6.2贮备液称取相当于650000U酶活的酶（5.6.1）溶于10mL冰冷的0.2mol/L硼酸钾缓冲液（5.5）中。该储备液在-18℃或更低的温度下可以长期保存。5.6.3工作液将2mL贮备液（5.6.2）和8mL冰冷的0.2mol/L硼酸钾缓冲液（5.5）混合。5.7脂肪氧化酶灭活液吸取数毫升脂肪氧化酶稀释液（5.6）至试管中，并保证无液滴粘附在试管壁上，将试管浸入沸水浴（6.6）中加热至少5min，稀释液的液面应低于水浴的液面。5.8参比油如葵花籽油或棉籽油，已知多不饱和脂肪酸含量（用气相色谱法准确测得，并以参比油的质量分数表示），并假定其全为顺,顺1,4-二烯

6、结构的脂肪酸。注：无位置异构和几何异构的甘油三亚油酸酯可作为参比。5.9氮气纯度不低于99.5%(质量分数)。6仪器所用玻璃器皿应非常干净。实验室常用仪器，尤其是下列仪器。6.1具塞容量瓶：100mL。6.2单标移液管：1mL，10mL，20mL。6.3刻度移液管：1mL，10mL。6.4具塞试管：10mL，干燥。可用具塞分光光度计比色杯（见6.8）替代（见9.6.2的注1）。6.5离心机：10mL离心试管。6.6水浴：沸腾。6.7水浴：温度保持在(50±2)℃。6.8分光光庋计：可于235nm测量吸光度，配有10mm石英比色杯。6.9分析天平。7取样5GB/T21495—2008/

7、ISO7847:1987按IS05555进行。8试样制备按GB/T15687进行。9分析步骤9.1验证实验在分析试样时，建议与试样平行分析已确知多不饱和脂肪酸（5.8）含量的参比油，以核对分析步骤。9.2试样称取50mg～200mg（取决于预期的多不饱和脂肪酸含量）试样（第8章），精确至0.1mg，于100mL容量瓶A（6.1）中。注：当所取试样数量相对于10mg～80mg多不饱和脂肪酸时，所测之最大吸光度在0.07～0.5之间。9.3皂化用单标移液管（6