线性范围试验操作步骤20111028

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1、线性范围试验（葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖）[目的]：1.掌握线性试验的原理、用途2.掌握可报告范围、分析测量范围的概念。3．熟悉线性试验的具体操作过程[原理]使用不同浓度的葡萄糖标准溶液，用GOD-POD法试剂测定各自的吸光度，以标准浓度为横坐标，以其对应的测定浓度为纵坐标，在方格纸上作图，即可绘制计量反应曲线。在实际工作中并不存在理想的反应曲线。实际中，随着溶液浓度的增加，会出现正偏差或负偏差的反应曲线。因此求出符合理想曲线的线性范围在实际工作中就显得比较重要。[试剂]1.葡萄糖标准液40mmol/L称取分析用的一水葡萄糖（C6H12O6·H2O）0.2970g，溶于蒸馏

2、水中并定容至100ml2.中生北控生物科技股份有限公司的葡萄糖氧化酶法试剂盒。3.蒸馏水。[实验器皿和仪器]1.大试管/小试管（配制系列浓度待测样品用）11支/15支2.100ul加样器1000ul加样器各1把3.试管架1个34.10ml移液管1支5.水浴箱秒表6.分光光度[操作步骤]1、将40mnol/L的标准液按照0.75的比例进行配制15管不同浓度的待测液，如表1所示。表1.加入物ML管号123456789101112131415蒸馏水00.250.250.250.250.250.250.250.250.250.250.250.250.250.251mL40mmol/L

3、标准0.75mL1号液0.75mL2号液0.75mL3号液0.75mL4号液0.75mL5号液0.75mL6号液0.75mL7号液0.75mL8号液0.75mL9号液0.75mL10号液0.75mL11号液0.75mL12号液0.75mL13号液0.75mL14号液理论浓度mmol/L40.0030.0022.5016.8812.669.507.125.344.003.002.251.691.260.950.712、选取上述系列浓度中的其中1、2、3、4、5、7、9、11、13、15管按照下表加入相应内容进行反应表2加入物(ml)空白QC标准管测定管1234579111315

4、5.55mmol/L标准液-0.000.040----------3质控品-0.040-----------待测标本---0.0400.0400.0400.0400.0400.0400.0400.0400.0400.040蒸馏水0.040------------葡萄糖试剂6.006.006.006.006.006.006.006.006.006.006.006.006.003、将配置好溶液混匀，置37℃水浴15min，在波长505nm处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度，将结果填入下表表3各管检测吸光度　空白标准管QC待测标本管号1234579111315吸光度AB

5、S第一组0　　　　　　　　　　第二组04.根据表3数据,计算各管葡萄糖的理论浓度并将数据填入下表,然后以其为横坐标,以对应得葡萄糖浓度的均值为纵坐标,绘制剂量反应曲线图。表4各管中葡萄糖浓度　空白QC标准管待测标本管号1234579111315葡萄糖浓度mmol/L第一组0　5.5　　　　　　　　　　第二组05.5平均浓度0　5.5　　　　　　　　　　5、数据处理及分析3