细菌个数的测定

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1、对返排液杀菌效果的测试方法实验原理：推测返排液主要的细菌为硫酸盐还原菌、铁细菌和腐生菌。通过加入不同杀菌剂，测量加入前后细菌含量，得出不同杀菌剂的杀菌率，优选效果最好的杀菌剂。实验仪器：1)硫酸盐还原菌（SRB）测试瓶；2)铁细菌（IB）测试瓶；3)腐生菌（TGB）测试瓶；4)注射器：1ml；5)恒温培养箱；6)电热消毒器。实验步骤：1)将测试瓶排成两组，并编号；这是二次重复法，三次重复法方法类似，不过要把测试瓶分为三组。2)用120℃消毒20min的无菌注射器取1.0ml水样注入第一组1号瓶内，充分震荡；3)用另一只无菌注射器从第一

2、组1号瓶中取1.0ml水样注入第一组2号瓶；4)再更换无菌注射器从第一组2号瓶取1.0ml水样注入第一组3号瓶；5)以此类推一只稀释到最后一瓶为止。根据细菌含量决定稀释瓶数，一般稀释到7号瓶；6)将杀菌剂加入到所测试的水样，用无菌注射器去1.0ml杀菌后的水样注入到第二组1号瓶内；7)用另外一只无菌注射器从第二组1号瓶去1.0ml水样注入第二组2号瓶；8)以此类推。根据细菌含量决定稀释瓶数，一般稀释到7号瓶；9)将上述测试瓶放入放入恒温培养箱中培养，温度控制在37℃，7d后读数；10)用下列公式计算杀菌率：Y=B1-B2B1×100%

3、Y——杀菌剂的杀菌率，%；B1——加杀菌剂前水样中细菌含量，个/ml;B2——加杀菌剂后水样中细菌含量，个/ml。备注：一、注意事项1)SRB测试瓶变黑或者有黑色沉淀，表示有硫酸盐还原菌；TGB测试瓶由红变为黄或浑浊，表示有腐生菌；IB测试瓶出现棕红色沉淀，表示有铁细菌。2)杀菌剂的加量为50mg/L;3)在室温下向水样注入杀菌剂，杀菌时间为4h；4)腐生菌的培养时间是5d~7d；铁细菌的培养时间是7d~14d，硫酸盐还原菌的培养时间是14d~21d。5)测试瓶大概为3元/瓶。二、读数方法：1.生长指标的确定原则：1)全部呈阳性反应的

4、最后一列平行样应为生长指标的第一位数。2)同一平行样，有X个阳性反应瓶，生长指标即为X。2.级数的确定原则：1)全部呈阳性反应的最后一列平行样的瓶号数减去1，即为级数n，以10n表示。2)1号瓶的2或3个平行样未全部发生阳性反应时，级数为0，即为100。3.细菌测试瓶测试方法及结果报告示例例：做三个平行样重复试验，每个样稀释5个梯度：123451′2′3′4′5′1″2″3″4″5″即分别在1、1′、1″号瓶中注入1ml水样，摇匀后取出1ml再分别注入2、2′、2″号，摇匀后取出1ml再分别注入3、3′、3″瓶中，以此类推直至注入到5

5、、5′、5″号瓶。在恒温下放置一段时间后，观察测试瓶阳性（变色）反应个数。即：1+2—3—4—5—1′+2′+3′+4′—5′—1″+2″+3″—4″—5″—所以读数为：321；级数：100（1-1=0）此生长指标为321，级数为100。通过查表可知，321对应的细菌量为15个/ml，此系列报告结果为：15×100=1500个/ml。1+2+3+4+5+1′+2′+3′+4′—5′+1″+2″+3″+4″—5″—此生长指标为312，级数为102（3-1=2）。通过查表可知312对应的细菌量为11.5个/ml。此系列报告结果为：11.5

6、×102=1173个/ml。1+2+3+4+5+1′+2′+3′+4′+5′+1″+2″+3″+4″+5″+300此生长指标为300，级数为104（5-1=4）。通过查表可知，300对应的细菌量为2.5个/ml。此系列报告结果为≥2.5×104=2600个/ml。例子11列2列3列4列5列+————++———+++——此生长指标为321，级数为100（1-1=0）。通过查表可知，321对应的细菌量为15个/ml。此系列报告结果为15×100=1500个/ml。例子21列2列3列4列5列+++——+++——+++++此生长指标为311，

7、级数为2（3-1=2）。通过查表可知，311对应的细菌量为7.5个/ml。此系列报告结果为7.5×102=765个/ml。例子31号瓶2号瓶3号瓶4号瓶5号瓶++—+—+++——此生长指标为211，级数为1（2-1=1）。通过查表可知，211对应的细菌量为13个/ml。此系列报告结果为13×101=1313个/ml。例子41号瓶2号瓶3号瓶4号瓶5号瓶—+———+—+——此生长指标为111，级数为0（1-1=0）。通过查表可知，111对应的细菌量为2.0个/ml。此系列报告结果为≤2×100=200个/ml注：a)做几个平行样对应查几

8、次重复计数表（即生化检测方法中的MPN表）。b)计算公式为：发生阳极反应瓶号数-1=级数，即在结果后应×10n。如1号瓶级数为0级，即在结果后×100；2号瓶级数为1级，即在结果后×101.c)如果第一列（1、1′、1″