iCycler iQ装机的几点注意事项

《iCycler iQ装机的几点注意事项》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、iCycleriQ装机和升级的几点注意事项一、配套电脑的并口输出模式：iCycleriQ的opticalmodule与配套电脑连接通过并口。要求在电脑启动后进入Bios设置，在并口输出模式（parallelportmode）一栏中选择EPP。二、Purdy与Mask：将iCycler安装完以后，必须进行Mask（对光路）和Purdy（纯染料校正）调节后才能进入使用状态。1、MaskMask的目的是将96个检测点的位置与96个反应孔的位置一一对应，保证荧光收集的准确性。步骤如下：1)取iCycleriQSolutionKit(170-8792)中的ExternalWellFactorSo

2、lution（10×）一支（棕色管盖），吸取液体0.5ml，放如一个至少5ml容量的干净的容器中，加入4.5ml蒸馏水稀释至5ml（10倍稀释），混匀。2)取iCycleriQPCRPlates（223-9441）一块，在其96个孔中各加入稀释好的ExternalWellFactorSolution（1×）50μl。3)加好样后，在板上盖一块干净的光学级封带（Optical-qualitysealingtape，223-9444），用刮板刮几下，使封胶与板粘紧。这块准备完的板就叫做ExternalWellFactorPlate。4)将ExternalWellFactorPlate放入机

3、器，盖好盖。打开系统软件，进入ImagingServices窗口；5)点击“AutoBias”使荧光信号探测器进入最佳工作位置。完成后“Bias”文件框会显示其调整值，再点击该文件框下方的“Save”键保存其设置；6)点击窗口右下方的“Home”键使滤光镜组归回原位；7)在“BothFilters”文件框中选择要使用的滤光镜组在选择转轮上的位置选项（一般选择2，既FAM滤光片），在“Exposure”文件框中选择曝光长度；8)点击“Expose”键。窗口左上方会显示出一幅反应板图象。在该图象上检查有没有孔像素饱和（如果有孔已经饱和，该孔会显示红紫色）。如果发现有孔像素饱和，在“Expo

4、sure”文件框中减少其曝光长度直到全部96孔全都没有饱和为止。如果没有发现像素饱和，逐渐增加曝光长度直到有孔出现饱和，然后再减少到其没有像素饱和出现的最大曝光长度；1)按住键盘上的“Shift”键，点击反应板图象上的A1孔（最左上的那个孔），打开mask文件。您也可以在上方文件框中选择“ShowMask”，然后通过点击窗口上方的方向键选中A1；2)点击“AutoInit”键，系统会自动调整遮光框到最佳工作位置。无论调整完成或调整失败，系统都会显示相应信息。如果调整失败，重复该步骤一次，如果再次失败，只能使用手动调节（见下文）；3)遮光框调整完成后，点击“SaveMasks”键。本次调

5、整结果将被保存在mask96.ini文件中（c:ProgramfileBio-RadiCyclerini）。注意：如果想调整某个孔的遮光框位置，点击反应板图象上的相应孔，其显示色会由绿变蓝，此时点击图象上方的各方向箭头键即可调整其遮光框位置。图象上方的“Inner”显示该孔的内方格读数，“Outer”显示该孔外方格读数，“Saturated”显示该孔的像素饱和度。点击图象内该孔外的任何位置，系统会保存对其的调整，同时该孔显示色由蓝变绿，相应读数和功能键恢复到针对整个反应板的状态。Mask窗口简介窗口顶部的箭头键用来手调遮光框的位置；窗口顶部的的数据分别代表反应板全部96孔平均遮

6、光框内矩阵（Inner）、外矩阵（Outer）读数和已经像素饱和的孔数（Satutated）。用户如果点击96孔模拟布局图上的某孔后，该孔在布局图上会变蓝，而上述三个数据也就分别显示该孔的遮光框内方格、外方格的读数和像素饱和度。窗口右侧可以选择滤光镜选择转轮上的位置（BothFilters）和曝光长度；窗口右下的三个文件框从左到右分别代表：iCycler的光学模块是否接好（CameraONLINE/OFFLINE）、增强器是否打开（IntensifierON/OFF）和热盖的情况（Lid）；点击“AutoBias”键后系统会自动调整摄象系统的偏差，使荧光信号探测器进入最佳工作位置；点击

7、“Expose”键后开始曝光，而“ExposureCount”文件框来监控曝光的过程；点击“AutoIni”键后系统开始自动选择最佳遮光框位置并对其进行校正；96孔模拟布局图下面的一系列功能键在手动调节中起辅助作用；可以通过窗口左下侧的“Load”、“Save”键来读取或保存Image文件。1、PurdyPurdy的目的是消除仪器中所安装的各个滤光片所检测的波长之间的干扰，保证荧光信号处理的准确性。由于每个用户购买仪器时所选择的滤光片各不相同，