罗氏实时荧光定量PCR仪

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1、实时荧光定量PCR仪一、实时荧光定量PCR的原理荧光定量PCR通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对结果进行分析，计算待测样品的初始模板量。荧光定量PCR仪荧光定量PCR仪是一种带有激发光源和荧光信号检测系统的PCR仪，通常配有电脑系统及相应的分析软件。定量PCR技术的产生1992年由Higuchi等人第一次报告：使用EB内插染料法插至双链DNA，经改装的带有冷CCD的PCR仪检测样品的荧光强度PCR循环=双链DNA=染料=荧光后来用与双链DNA有更强结合力的SYBRGreenI取代EB荧光定量实时PCR

2、与普通PCR的比较实时在线监控对样品扩增的整个过程进行实时监控，能够实时地观察到产物的增加，直观地看到反应的对数期降低反应的非特异性使用引物和荧光探针同时与模板特异性结合，提高了PCR反应的特异性增加定量的精确性全程监控，准确的算法进行定量结果分析更加快捷方便，无需跑胶罗氏产品介绍以及与同类产品之间的对比一、LC1.5和LC2.0LightCycler荧光定量PCR系统LC1.5LC2.0Lightcycler1.5结构分析以空气加热及冷却迅速改变温度带有极高表面积/容量比例的密封20l毛细管加热线圈可容纳32个样品的卡盘将荧光仪定位的分档器发动机将样品置于光学仪上的分

3、档器发动机热室风扇滤器免维护的LED光源光学倍增管Lightcycler2.0结构分析空气加热系统LED激发光源PMT检测系统光纤热力学结构特点：1、空气加热2、毛细管反应体系优点:1、升降温速度快（0.05℃-20℃/秒），2、体系均一，不存在边缘现象3、把反应体系缩小到0-20ul，节省试剂成本实现快速PCR光学结构特点：1、免维护的LED冷光源，寿命长达2万小时以上2、光学倍增管（Rodenstock）3、多达6通道（LC2.0）和3通道（LC1.5）实时检测优点：1、毛细管光学特性将光线散射、衍射降至最低，避免LED功率低的问题2、免维护，带自动检验功能3、轻易实

4、现内标、内对照及多重PCRLightCycler结构分析激发光源Rodenstock-LED（发光二极管）冷光源，免维护，开机可以马上进行操作。检测系统光学倍增管(PMT)灵敏度高，宽检验范围,背景低，无边缘效应加热方式空气加热管间差小，热传导速率20℃/秒，温控变化准确（0.05-20℃/秒）。反应体系两种石英玻璃毛细管体系(20ul和100ul)光学性好，反应体系小，节约试剂成本,适合多种用途。检测光路范围530nm,555nm,610nm,640nm,670nm,710nm.六个波长，并解决相关荧光素荧光干扰问题LightCycler软件4.0更先进的自动定量方法全

5、新的相对定量软件全自动熔点曲线分组全自动熔点温度提示简化数据和用户管理PCR领域最聪明的革新–LightCycler荧光定量PCR系统超高速30至40分钟完成PCR过程实时在线监测收集每一循环的数据并立即显示于联机电脑上高灵敏在一个基因组当量中可检测出单基因拷贝范围广可检测10－1010拷贝线性范围，无需稀释样品开放性全开放，成为国内外试剂厂家的首选开发平台六个荧光通道轻易实现内标、内对照或多重PCR最小化定量反应体积降至10－20ul，费用低廉灵活性支持水解探针、杂交探针及SYBRGreenI闭管分析消除污染风险Lightcycler的分析模式适用于所有的通用探针及染料

6、分析模式：SYBRGreenI（荧光染料）TaqMan（水解探针）Molecularbeacon（分子信标）Lightcycler上开发独有的分析模式：HybridizationProbeFormat（杂交探针）SimpleProbe（单探针）SYBR-GreenI检测模式SYBRGreenI能选择性地与双链DNA结合，在外界光源激发下产生强烈荧光。在PCR过程中，SYBRGreenI可与新合成地双链DNA结合，产生地荧光信号强度与双链DNA含量成正比，荧光检测在每一循环的延期后进行。SYBRGreenI与非特异性双链DNA（如引物二聚体）结合产生的干扰可通过融解曲线分析

7、而得到解决。水解探针（Taqman）检测模式同时标记有荧光发光分子和荧光淬灭分子的一条探针在激发光作用下，发光分子所产生的荧光可被淬灭分子吸收，因而检测不到荧光。在PCR延伸时，因Taq酶具有的5，－3，核酸外切酶活性，可降解荧光探针，使荧光发光分子与荧光淬灭分子分开，在外界光源激发下即可发出荧光，荧光强度与PCR扩增产物量有关。分子信标（MolecularBeaconProbe）独特的颈环结构，由非特异的颈和特异的环组成，探针的5’端标记荧光分子，3’端标记一个吸收或淬灭荧光的分子。自身环化时仪器检测不到荧光，在PCR反应的