2.FluorCam叶绿素荧光成像技术

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1、FluorCam叶绿素荧光成像技术北京易科泰生态技术有限公司*info@eco-lab.cn叶绿素荧光成像•直观、无损、非接触•测量区域即足够小又足够大•代表性强，荧光仪测量存在取样盲目的问题。（光纤、微光纤荧光仪）测量点越小，则盲目性越大。•拟南芥等小植物及不规则区域测荧光用成像更方便QY局部放大图分辨率512X512成像面积3X3cm单像素代表面积：60X60um理想的仪器是什么样子？•适用性（宏观&微观，室内&室外，光合生理&基因工程）•测量结果（可靠，时间分辨率&空间分辨率）•功能（越强越好）•软件（人性化、便于操作）•携带（方便）•耐用（维护量低）•科研界认可度（文献）Fluorc

2、ams荧光成像技术（一）适用性（二）测量技术（三）硬件配置（四）功能特点（五）Fluorcam软件功能（下午演示）（六）Fluorcams系列产品（七）Fluorcams在各领域的应用（一）Fluorcam的适用性适用于各种复杂情况•测量面积（显微视野到样带成像）•适用范围（叶绿体——群落）•从二维成像到三维成像•样品大量筛选（条码识别）•可用于荧光蛋白与荧光素成像•弥补普通荧光成像对荧光瞬变过程在时间分辨上的不足（二）先进的测量技术•fm•mfm•mfmsub并非只有一幅图片，优于其他荧光成像设备示意mfmsub一个典型的NPQ测量过程共进行318次测量，产生318幅图片（三）优越的硬件配

3、置基本LED光源：一组光源提供测量光和光化光1(618nm)另一组光源提供光化光2和饱和光——需根据实际需求选择红（稳定）、蓝（能量高&气孔）或白光（贴近自然光照）光化光强度标准配置：2,500µmol(photons)/m².s升级配置：5,000µmol(photons)/m².s（光胁迫）饱和光强度标准配置：3,000µmol(photons)/m².s（多次翻转）升级配置：10,000µmol(photons)/m².s（单次翻转）STF光强度120,000µmol(photons)/m².s，100µs脉冲(QA再氧化版)辅助光源远红光源•用于：1.激发PSI，测量真实F’；2.测

4、量叶片的真实吸光系数（ETR）0额外的紫外光源•用于：1.多色荧光，UV可以激发蓝F440、绿F520、红F680、远红F740；2.作为wtGFP，DAPI的激发光源额外的青/蓝/绿/黄光源•安装在系统上部的额外LED发光板，低于相机，相机物镜从LED板中间穿过。该光源提供了特殊研究中使用多色激发光的可能。可用光色：紫外，蓝，青，绿，黄，橙。•青色光源：1.用于气孔功能研究，2.作为EGFP的激发光源•绿色光源：用于YFP的激发光源（紫外激发的荧光亮度高但持续时间短，可见光激发的荧光亮度低但持续时间长）高品质LED光源光源排列与组合高性能CCD高速成像镜头：•A/D：12bit(4096灰

5、度)•分辨率：512x512像素•像素大小：8.2µmx8.4µm•拍照速度：每秒50幅•成像面积：3X3cm；13X13cm；20X20cm•单像素代表面积：60X60um；0.25X0.25mm；0.4X0.4mm曝光时间可达10μs，可选20μs、33μs，以及更长——适用于快速过程记录时间分辨率概念：单张曝光时间（远高于50幅每秒）与连续测量记录（动力学过程连续记录50幅每秒）高性能CCD高分辨率镜头•可选模式：-2x2-696x520像素,25幅每秒-3x3-464x344像素,20幅每秒-4x4-348x256像素,50幅每秒•成像面积：3X3cm；13X13cm；20X20cm

6、•单像素代表最小面积：21.6X28.8um；93.4X125um；144X192um曝光时间可达10μs，可选20μs、33μs，以及更长——适用于慢速过程与荧光蛋白或荧光素成像；高空间分辨率研究；成像面积大时更需要（四）Fluorcams的功能特点基本参数•Fo、Fm、Fv/Fm•Fo’、Fm、Fm’、Fs、QY(II)、ETR、Rfd、qP、NPQ（qN）基本测量过程•Kautsky诱导过程•荧光淬灭过程（整个过程都以图像记录，而非只有几个特定时间点的荧光参数图像）强化功能与配置选择PAR吸收模块——测量真实F’，PAR吸收系数（植物经历胁迫处理后处0于非正常状态，公式推导的F’和经验

7、吸光系数可能完全不适用，会导0致荧光值错误，进而导致ETR、Rfd、qP、NPQ（qN）等重要参数计算错误）OJIP模块——进行OJIP快速荧光动力学分析（对环境胁迫非常敏感，精细反映电子激发与传递过程，PI等参数直接反映植物活性）QA再氧化模块——QA再氧化动力学测定的高级配置，以pump-and-probe方式工作,例如以可变的时间延迟测定闪光后的荧光发射情况，并重复进行。（反映QA-向QB的电子传递过程