资源描述：
《圆背角无齿蚌血细胞培养》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第25卷第2期水生生物学报丫bl.25,N6.22001年3月.,2001ACTAHYDROBIOLOGICASINICAMar圆背角无齿蚌血细胞培养‘‘,‘石安静邱安东唐敏余燕萍‘“张洪渊盯井昭,(1四川大学成都610064;2日本山胜珍珠养殖研究室),摘:用新设计的培养基培养了圆背角无齿蚌的血细胞要在倒置相差显微镜下进行了活。、、体观察及扫描电镜摄影发现培养的血细胞有无颗粒细胞颗粒细胞透明细胞和类淋巴。,,;细胞前三者均能伸出长的伪足和突起与瓶壁紧密贴附呈体外培养的成纤维细胞型,。后者呈圆形不与瓶壁贴附;四者的比例约为4:2:3:1在活体内注射或在培养基上加人
2、,,,,PHA和Cb几A培养2一7d中每天取部分供加人秋水仙素用空气干燥法制片作染色体观察,但未观察到转化。,圆背角无齿蚌的颗粒细胞、细胞和有丝分裂相研究结果表明无。颗粒细胞和透明细胞在体外贴附玻璃表面的特征与高等动物的巨噬细胞类似而不贴瓶。,的圆形细胞与高等动物的淋巴细胞类似但在体外培养均不能繁殖它们可能是高度分化。的细胞:圆背角无齿蚌;血细胞;关键词培养:.:中图分类号印6224文献标识码A文章编号:1000一3207(2001)02一0116一07,,动物血细胞在体外培养已开展非常普遍这是由于取血比其它组织细胞更容易它既,。少影响动物的正常生理功能又可多次抽
3、取同一个体的血液进行反复实验脊椎动物的外周血在体外用植物凝集素(PHA)进行刺激可使淋巴细胞进人分裂周期而得到大量的,。分裂相所以该技术已成为细胞遗传学和实验肿瘤学研究等常用技术,,贝仁‘〕类的细胞培养开展极少日本叮井昭曾作过海产的阿古屋贝外套膜的组织培养石安静曾报道了三种淡水贝外套膜的组织培养及染色体研究和河蚌钩介幼虫的原代细胞。。,[2刊]培养河蚌血细胞的培养国内外还鲜见报道这一方面是由于河蚌血液无色没有,,,,可见的血管不便从血管抽取而心脏又为薄膜状为开放式血循环要抽取能供细胞培养,,,,的血液十分困难而且河蚌心脏在近壳顶处从心脏抽血时从外套膜不断有水往下流
4、非。,。常容易污染过去河蚌体液渗透压尚未见借鉴资料配制的培养基难以适合其生长所,,以作者通过测定河蚌体液渗透压后并根据体液氨基酸测定新设计了培养基改进了取血,,、、方法进行了血细胞的体外培养期望为淡水贝类血细胞的形态结构分类和功能的研究。提供有益的资料:1998一07一02;:2000一03一22收稿日期修订日期:国家自然科学基金资助项目编号:397705基金资助86:石安静,女,重庆市梁平县人;;主要从事淡水贝类的研究作者简介教授:2期石安静等圆背角无齿蚌血细胞培养1材料和方法.、on了之叉-11材料使用中国广泛分布尚能产珍珠的圆背角无齿蚌(An叔ta众艺ian
5、aPaciu,。五caHede)采自成都郊区大面铺池塘.12渗透压测定用日本第一科学(厂)生产的渗透压仪(C地mostatOM一6020)测定的。圆背角无齿蚌体液渗透压为42Osln/吨1.3培养基配制平衡盐溶液配制同文献[5]。培养基氨基酸成分根据河蚌体液氨酸测,,.organ等设计的19综合培养基相比gL3;定结果与M增加(m/)牛磺酸70磷酸丝氨酸8.00;鸟氨酸13.20;氨基丁酸20.60;天门冬酞胺7.90;而减少了L一胧氨酸、L一谷氨、、、、、。酸L一麦酞胺甘氨酸L一蛋氨酸L一脯氨酸L一经脯氨酸培养基中维生素(mg/L)加人偏多酸钙10;氯化胆碱12
6、;叶酸10;落酞胺10;盐酸毗哆醇10;肌醇20;核黄素.1,0。.,、:;llllL加胎牛血0In1L维生素Bl10维生素段0综合培养基每o清青霉素卡那霉素。各100(阔L)1.,。4血细胞培养因心脏取血易污染改为从闭壳肌取血每只蚌抽取5一10mL用,,,,75%乙醇消毒闭壳肌以后将注射器插人闭壳肌慢慢抽取血液注人培养瓶放置1一,,,。Zh再用吸管将血清吸出加人培养基27℃恒温箱中培养培养的血细胞用倒置相差显。微镜作活体观察及摄影1.5注入或加入有丝分裂原的培养注人有丝分裂原的培养是在取血前1d和Zd在蚌.n,A)各1的内脏团中注人PHA或6nA(刀豆蛋白059
7、(用蚌平衡盐溶液溶解为IL)然后。,从闭壳肌取血进行体外培养加人有丝分裂原的培养是取血前不作任何处理而在培养..,,,基中加人最终浓度为002一代〕2mg八11LPHA或取血细胞培养2一7d每天取一批肠nA于终止前6一12h加人秋水仙素(最终浓度为0.02mL),然后用蒸馏水低渗,卡洛液固阔,。定用空气干燥法制备染色体1.6扫描电镜观察将培养4一币d的血细胞振摇或用吸管吹打下来,倒人离心管,以,,,500一800r/min离心5而n用滤纸吸去多余的液体用1%的戊二醛(4℃)预固定Zh用磷,,,,酸缓冲液洗3次1%锹酸后固定1h逐级丙酮脱水醋酸异戊醋置换丙酮作临界点
8、干,,。燥
