GC方法开发基础

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1、GC方法开发基础如何系统、严谨地开发气相色谱分析方法从设置仪器参数...到调整温度和流速...有效的方法开发实践对达到最佳性能和取得可靠结果非常重要。这就是为什么我们把最关键的方法开发程序都放在一起–并且唾手可得的原因。例如，我们将说明如何...•得到最佳的分离度–并缩短分析时间–通过确定最佳载气平均线速度•为各种样品类型选择默认的进样器设定值–包括挥发性样品（如溶剂）和高沸点样品（如类固醇、甘油三酸酯和表面活性剂）•确定是程序升温还是恒温条件最适合您的应用•完善开发升温程序的最新技术–包括设置初始温度及保持时间、调节

2、升温速率以改善中间流出峰的分离度、确定最终温度和时间，并对峰定性进行确认通过采取本部分的建议，您可以将效率、质量和成本效益融入到您开发的每个方法中。133方法开发的基础寻找最佳载气平均线速度确定最佳平均线速度相当容易，仅需要很少的尝试过程。氢气可在最短时间内提供最佳分离度。氦气可以提供相似的分离度，但是花费的时间较长。由于所需分析时间非常长，因此不建议将氮气与毛细管色谱柱一起使用。使用氦气作为载气时，尝试将初始平均线速度设为30cm/sec。如果需要更高的分离度，请将速度减小到不小于25cm/sec；但是，分析时间会增

3、加。如果需要较短的分析时间，请将速度增加到35cm/sec，最高可增到40cm/sec。注意在较高的线速度下潜在的分离度损失。可能还需要对柱温箱温度进行微小的调整。使用氦气作为载气时，30-35cm/sec的平均线速度可用于许多分析。使用氢气作为载气时，尝试将初始平均线速度设为60cm/sec。如果需要更高的分离度，则请将速度减小为不小于50cm/sec；但是，分析时间会增长。如果需要的分析时间较短，则请将速度增加到70cm/sec，最高可增到80cm/sec。小心在这些较高速度下潜在的分离度损失。可能还需要对柱温箱温

4、度进行微小的调整。使用氢气作为载气时，60-70cm/sec的平均线速度可用于许多分析。将各种平均线速度下的色谱图进行比较，即可注意到保留和分离度的变化。有时，在同一色谱图中不同的平均线速度适合不同的峰。在这些情况下，通常选择折衷速度。除氮气外，平均线速度较小的改变(<2cm/sec)很少会使分离度有很大变化。因此使用平均线速度进行实验时，两次尝试应相差至少3-4cm/sec。134网上订购，请登录www.agilent.com/chem/store/cn方法开发的基础进样器缺省设置250ºC的进样器温度足以适合几乎所

5、有的样品。对于诸如挥发性溶剂等挥发性样品，建议进样器温度使用150-200ºC。对于诸如类固醇、甘油三酸酯或表面活性剂等的高沸点样品，建议进样器温度使用275-300ºC。要确保隔垫可以承受高的进样器温度。大多数样品可以使用多种进样器条进样器缺省设置件或参数进行分析。这会产生一组大口径直接进样分流不分流相当标准且适合多数样品的进样器温度：250ºC250ºC250ºC衬管：直接闪蒸直管或沙漏形带有底端限流的直管条件。由于默认或标准进样器设置进样：1µl1µl1µl适合80-90%的样品，因此开发新分流比：1:50方法时

6、这些条件是良好的起始条件。吹扫活化使时间：0.5分钟柱温箱温度恒温条件是指在GC运行过程中柱温箱保持温度恒定。恒温条件用于保留相似的溶质。恒温条件下，不相似溶质的保留相差非常大。恒温条件下，峰宽随保留的增加而迅速增加（图10a）。由于这些原因，因此恒温条件仅适合于有限数量的分析。图10a：恒温条件色谱柱：DB-1，15mx0.25mm内径，0.25µm载气：氦气，30cm/sec柱温箱：100ºC恒温C10C11C12C13C14C15C1601020304050Time(min.)网上订购，请登录www.agilen

7、t.com/chem/store/cn135多数分析需要使用温程序升温。程序升温是指在运行期间以可控速率对柱温箱进行加热。这可以更快速地分析保留不相似的溶质，且随着保留的增加峰展宽的程度很小（图10b）。程序升温的主要缺点是方法开发过程比较困难，且连续分析之间GC柱温箱冷却时间较长。寻找分析的最佳升温程序没有秘密或诀窍。通常需要尝试过程。调整升温程序时的警告如果在不同升温程序下的多次尝试都未产生令人满意的峰分离度，则可能需要使用其它的方法。一些化合物在任何合理的升温程序下使用某种固定相也不能得到分离，因此可能改变升温程

8、序时，在新的色谱图中峰的需要使用其它固定相。有时，改善效率即可解决问题。优化载气平均线速度，改善进样识别非常重要。峰保留顺序可以随着升器效率或使用更有效的色谱柱尺寸可提供所需的分离度。温程序（称为峰倒置）的改变而变化。错误地识别峰或峰明显的损失（实际与其它峰共流出）通常是由未检测到的峰倒置所致。对多数极性固定相尤为如此。图10b: