植物乳杆菌ZJ317产细菌素的初步研究

《植物乳杆菌ZJ317产细菌素的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、lIJlllIMIIIIIllrlllHIIIllfllllHl、t1524299中图分类号：TS201．2⑩浙炉z角硕士学位论文作者姓名：学科专业：研究方向：指导教师：李景良生物化工生物工程顾青教授提交日期：2009年1月一乎级密矢浙江工商大学硕士学位论文植物乳杆菌ZJ317产细菌素的初步研究摘要乳酸菌是一种在食品发酵工业中应用广泛的益生菌。1928年，首次报道了乳酸菌的代谢产物有抑菌作用，接着证明了这种物质是细菌素，1969年，FAO／WHO确认乳酸菌素Nisin为安全、高效、可靠的食品防腐剂。近年来，由于食品病原菌和人

2、工合成防腐剂危害的加剧，人们开始寻找天然安全的防腐剂代替，乳酸菌素以其良好的抑菌性和安全性而受到了越来越多的关注，同时，由于乳酸菌素具有高效、无毒、无残留、无抗药性等优点，也被认为是抗生素的最有效的替代物。本实验室从儿童粪便中筛选出一株具有抑菌活性的乳酸菌，本实验对其进行了初步的研究，主要内容包括：(1)通过形态学观察，生理生化特征分析和16SrRNA进化分析对该菌株进行了鉴定，发现该菌是一株植物乳杆菌属菌种，暂时将其命名为植物乳杆菌ZJ317(L．plantarumZJ317)，相应地其所产细菌素命名为植物乳杆菌素ZJ31

3、7(plantaricinZJ317)。plantaricinZJ317在酸性条件下活性最强，稳定性也最高。当pH值超过4．5即失去活性。耐热，121℃处理30min仍能保留70％的活性。对蛋白酶K和胰蛋白酶敏感，分子量约为4kDa。(2)plantaricinZJ317属于广谱性细菌素，抑菌谱包括大部分革兰氏阴性菌和部分革兰氏阳性菌，如恶臭假单胞菌、枯草芽孢杆菌、单增李斯特氏菌、福氏志贺氏菌、柠檬色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌等，但对其自身生长不具备抑制作I浙江工商大学硕士学位论文用。(3)利用同源引物克隆到乳酸菌中多个与

4、已知细菌素表达相关的基因，其中有一条新的基因，含有长约129bp的ORF。是plantaricinZJ317的疑似基因。(4)改变培养基和培养条件能大幅提高plantaricinZJ317的活性。酵母提取物、蔗糖较为有利于L．plantarumZJ317生产plantaricinZJ317。培养基组成为酵母提取物10g／L、蛋白胨10g／L、柠檬酸三铵2g／L、蔗糖10g／L、葡萄糖10gm、磷酸氢二钾4gm、吐温80lmL／L、培养初始pH为6．5、培养温度为30。C时活性最高，可达原来的2．5倍。关键词：乳酸菌素；菌种鉴

5、定；基因分析；表达研究II浙江工商大学硕士学位论文STUDYOFPLANTARICINZJ317PRODUCTEDBYL删Ⅳ别只嘲Z．乃17ABSTRACTLacticacidbacteria(LAB)，akindofProbioticswhichplayanessentialroleinfoodfermentationindustry．In1928，thelacticacidbacteriametaboliteswerereportedhadantimicrobialeffectsforthefirsttime，which

6、wasprovedtobebarteriocin．In1969，FAO／WHOconfirmedthatthelacteinNisinwasthesafe，efficientandreliablefoodpreservatives．Duetotheincreasingharmoffoodpathogensandsyntheticpreservativesinrecentyears，peoplebegantosearchnaturalpreservativesinplaceoftraditionalpreservatives．

7、Owingtoitssafetyandhighefficiency,lacteingetsmoreandmoreattention．Atthesametime，becauseoflacteinisnon-toxic，non—residual，non—drug—resistant，itisalsoconsideredtobethemosteffectiveantibioticalternative．WescreenedaLABwhichhasantibacterialactivityfrombabyfecesandinitia

8、lresearchwascarriedout．Wefoundthat：(1)Throughtheobservationofmorphological，physiologicalandbiochemicalanalysis，theidentifyof16SrRNA，wefoundthatth