核酸的凝胶电泳

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1、生物秀实验频道——生命科学实验中心www.bbioo.com/bio101核酸核酸的的凝胶凝胶电泳电泳NuNucclleeiiccAAcciiddGGeellEEllececttrrophoophorresesisis生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区www.bbioo.com/bbs生物秀实验频道——生命科学实验中心www.bbioo.com/bio101CConontteennttooffTTaabblele前言一、琼脂糖凝胶电泳二、聚丙烯酰胺凝胶电泳三、脉冲场凝胶电泳生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助

2、社区www.bbioo.com/bbs生物秀实验频道——生命科学实验中心www.bbioo.com/bio101前前言言核酸凝胶电泳是分子克隆核心技术之一，用于分离、鉴定和纯化DNA或RNA片段；优点：（1）便于分离;（2）便于检测;（3）便于回收：生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区www.bbioo.com/bbs生物秀实验频道——生命科学实验中心www.bbioo.com/bio101核酸凝核酸凝胶胶电电泳泳的基本的基本原理原理1）核酸分子之糖-磷酸骨架中的磷酸基团，呈负离子化状态；核酸分子在一定的电场强度

3、的电场中，它们会向正电极方向迁移；2）由于在电泳中往往使用无反应活性的稳定的支持介质，电泳迁移率（或迁移速度）与分子的摩擦系数成反比。而摩擦系数是分子大小、介质粘度等的函数；因此，可在同一凝胶中、一定电肠强度下、在凝胶上分离出不同分子量大小或相同分子量但构型有差异的核酸分子。Home生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区www.bbioo.com/bbs生物秀实验频道——生命科学实验中心www.bbioo.com/bio101一、一、琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳AAgagarroseoseggeelleellece

4、cttrropophhoorresesisis生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区www.bbioo.com/bbs生物秀实验频道——生命科学实验中心www.bbioo.com/bio101（一）凝胶的制备及电泳（一）凝胶的制备及电泳生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区www.bbioo.com/bbs生物秀实验频道——生命科学实验中心www.bbioo.com/bio101生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区www.bbioo.com/bbs生物秀实验频道——生命科学实验中心www.bbioo.co

5、m/bio101（二）DNA的迁移速率决定因素生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区www.bbioo.com/bbs生物秀实验频道——生命科学实验中心www.bbioo.com/bio1011DNA分子的大小双链DNA分子迁移的速率与其碱基对数的常用对数近似成反比；2琼脂糖浓度浓度越低，相同核酸分子迁移越快；生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区www.bbioo.com/bbs生物秀实验频道——生命科学实验中心www.bbioo.com/bio1013DNA的构象一般同一分子：超螺旋环状＞线状＞切口环状。4

6、凝胶和电泳缓冲液中的溴化乙锭溴化乙锭（EB）插入双链DNA造成其负电荷减少、刚性和长度增加。生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区www.bbioo.com/bbs生物秀实验频道——生命科学实验中心www.bbioo.com/bio1015所用的电压低电压时DNA片段迁移率与所用的电压成正比。6琼脂糖种类常见的有两种：标准琼脂糖和低熔点琼脂糖；生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区www.bbioo.com/bbs生物秀实验频道——生命科学实验中心www.bbioo.com/bio101不同类型琼脂糖的性质不同

7、类型琼脂糖的性质熔化温度/琼脂糖类型凝结温度/℃℃35~3890~95标准琼脂糖40~4285~90不同厂家高强度琼脂糖34~4385~95生产的不修饰的低熔点/25~3563~65同商品其凝点琼脂糖3565凝结温度超低熔点8~1540~45和熔化温度有一定25~3070低黏性低熔点琼差异3885脂糖3075生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区www.bbioo.com/bbs生物秀实验频道——生命科学实验中心www.bbioo.com/bio101不同类型琼脂糖分离不同类型琼脂糖分离DDNANA片片段的范围段的

8、范围浓度标准高强度低熔点低黏度低（%）(kb)(kb)(kb)溶点(kb)0.31~500.50.7~250.80.5~150.8~100.8~101.00.25~120.4~80.4~81.20.15~60.3~70.3~71.50.08~40.2~40.2~42.00.1~30.1~33.00.05~10.5~14.00.1~