猪瘟耐热冻干保护剂活疫苗

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1、猪瘟耐热冻干保护剂活疫苗王栋研究员中国兽医药品监察所一.耐热冻干保护剂基质的分类二.耐热冻干保护剂作用机理三.耐热保护剂在配制过程中注意事项四.耐热保护剂冻干工艺的优化五.耐热冻干保护剂活疫苗在冻干过程中常见异常现象的处理1.耐热保护剂特性有免疫活性但无药理活性能在冻干和保存时维持疫苗的稳定性在初次干燥时适宜的温度下疫苗不倒塌低成本易获取易灭菌可溶性外形美观—.耐热冻干保护剂基质的分类2.按相对分子量分类低分子化合物—提高微生物存活率形成均一悬液。①酸性物质：谷氨酸、天冬氨酸、乳酸②中性物质：乳糖、蔗糖、海藻糖、山梨醇③碱性物质：精氨酸、组氨酸高分子化合物—对微生物保护作用，促进升华形成

2、耐热骨架阻断热传导和热辐射。如：白蛋白、明胶、蛋白胨、脱脂奶粉明胶Sigma公司：175、225、325水解明胶：德国、美国国产明胶（北京、上海）脱脂奶粉Difco脱脂奶粉国产脱脂奶粉制备酸奶用，无抗生物素食品用脱脂奶粉工业用，沉淀剂、絮凝剂脱脂奶粉、明胶（175、225、325）在冻干过程中的作用促进升华易取得均质产品加热灭菌扩大细胞相互间的距离3.按保护剂功能和性质分类（1）耐热冻干保护剂疫苗在冻结和干燥过程中，防止活性组分发生变性。如：海藻糖、蔗糖、聚乙烯吡咯酮（PVP）等（2）填充剂防止组分随水蒸气一起升华逸散。如：甘露醇、明胶等（3）抗氧化剂自身氧化，消耗冻干样品内部和环境中的

3、氧阻断冻干样品中氧化链式反应抑制氧化酶的活性，防止样品在冷冻干燥及储藏过程中氧化变质。如硫代硫酸钠、维生素E、维生素C（4）酸碱调整剂将生物制品pH调整到活性物质的最稳定范围进行冷冻、干燥。如：磷酸二氢钾、磷酸氢二钠4.按物质的种类分类糖/多元醇类聚合物类表面活性剂类其它添加剂类糖/多元醇类①单糖：葡萄糖、半乳糖②低聚糖：蔗糖、海藻糖③多元醇：甘露醇、山梨醇、丙三醇功能和作用:糖与生物制品活性组分的分子形成氢键而代替了原有水的位置起保护作用低聚糖：低温保护功能和脱水保护作用多元醇和糖一样，官能团也是羟基海藻糖①具有相对较高的玻璃化转变温度。海藻糖—蛋白质—水微冰晶的形成而提高，有效防止了

4、水对玻璃化态的增塑作用②较弱的吸湿性③内部氢键少，有利于蛋白质分子之间形成氢键④化学活性非常低甘露醇①白色结晶粉末，无臭、味甜，水中易溶②无菌滤液稳定，不易被氧化③提供支持结构④不与活性组分发生反应⑤1.4%PVP冻干样品脆断力为142g，有收缩迹象，与甘露醇联合使用，抗断裂的强度可提高3～25倍，保证冻干物料的颜色和质地均匀，没有收缩山梨醇①山梨醇是甘露醇的同分异构体，但其溶解度比甘露醇大，在常温下黏稠状透明液体，有旋光性；略有甜味，具有吸湿性，高温下不稳定。在冷冻干燥配方中，山梨醇用作填充剂②与PVPk30合用减少产品裂纹，易碎性聚合物类如：聚乙烯毗咯烷酮、葡聚糖、牛血清白蛋白聚合物

5、类具有以下的性质：①聚合物在冻结过程中优先析出②具有一定的表面活性③在蛋白质分子之间产生位阻④提高溶液黏度⑤显著提高玻璃化转变温度⑥抑制小分子赋形剂（如蔗糖）的结晶⑦抑制溶液pH值变化聚乙烯毗咯烷酮（PVPK30）①常被用作澄清剂、色素稳定剂和胶体稳定剂②PVP对生物材料的低温保存和冷冻干燥，都是很好的保护剂③它在脱水干燥过程中又是很好的填充剂，对生物制品起到很强的支撑作用④在含有缓冲剂的乳酸脱氢酶配方中，10％的PVP因能抑制磷酸氢二钠的结晶，从而抑制了系统的pH降低表面活性剂类降低界面的张力，亲水、亲油基组成的化合物。表面活性剂在冻结和脱水过程中降低冰-水界面张力所引起的冻结和脱水变

6、形，又能在复水过程中对活性组分起到润湿剂和重褶皱剂的作用。表面活性剂可分为离子型和非离子型。凡是溶于水时能电离成离子的，称为离子型表面活性剂，否则，称为非离子型表面活性剂。在冻干生物制品测定长期储藏中，表面活性剂并没有保护作用。氨基酸类保护剂氨基酸是蛋白质的基本构成单位，其中最主要的是α-氨基酸。它是由一个氨基（-NH2）、一个羧基（-COOH）、一个氢原子（-H）和一个R基团（-R）连接在一个α碳原子所组成常用的氨基酸类的保护剂：甘氨酸、谷氨酸、精氨酸、组氨酸甘氨酸是最好的填充剂氨基酸①甘氨酸、谷氨酸或谷氨酸钠②L-半胱氨酸③L-组氨酸④L-精氨酸⑤复合氨基酸（199、MEM）甘氨酸①

7、低浓度甘氨酸可通过抑制10或100mol/L磷酸缓冲盐结晶，所致pH值的改变而阻止蛋白质药物变性②可阻止冻干过程中重组人生长激素的聚集③能升高成品的塌陷温度，阻止因塌陷而引起的蛋白质药物的破坏不同氨基酸对微生物的保护甘氨酸、谷氨酸钠－病毒、细菌、HVTL－精氨酸－POX、HVT、PPVL-半胱氨酸－ND、IBD、IBVL-组氨酸－MD、IBD、IBV其它添加剂类（1）抗氧化剂（2）缓冲剂（3）冻干加速剂抗氧化剂①自身氧化，消耗冻干样