基因定性检测方法及其标准化_李俊沈旻伟武玉花吴刚

《基因定性检测方法及其标准化_李俊沈旻伟武玉花吴刚》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、生物技术通报·研究报告·BIOTECHNOLOGYBULLETIN2013年第12期Barnase基因定性PCR检测方法及其标准化李俊沈旻伟武玉花吴刚（中国农业科学研究院油料作物研究所农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室，武汉430062）摘要：Barnase基因编码核糖核酸酶，在基因工程育种中通常被用于创建雄性不育系。为了满足转barnase基因作物安全监管的需要，建立了barnase基因普通PCR、实时荧光PCR检测方法，具有良好的扩增特异性和检测灵敏度。barnase基因定性PCR检测方法经过了国内8家有资质的实验室的循环验证，结果表明该方法能够特异性检测样品中bar

2、nase基因，检测灵敏度均达到0.10%以上，且检测结果具有良好的重复性和重现性。符合标准方法检测特异性强、灵敏度高、重复性好的要求，为我国转barnase基因作物检测和转基因生物安全管理制度的实施提供了相应的技术支撑。关键词：转基因检测Barnase基因普通PCR实时荧光PCR循环验证DevelopmentandStandardizationofQualitativePCRDetectionMethodTargetingbarnaseGeneLiJunShenMinweiWuYuhuaWuGang（OilCropsResearchInstituteofChineseAcade

3、myofAgriculturalSciences，Wuhan430062）Abstract:Barnasegene,encodingaribonuclease,isusuallyusedfordevelopingmalesterilitylineingeneticengineeringresearch.Inordertomeettherequirementsofsafetyregulationoftransgeniccrops,theconventionalPCRandreal-timePCRdetectionmethodstargetingthebarnasegenewere

4、developed,displayingexollentamplificationspecificityandtestsensitivity.Thequalitativemethodstargetingbarnasegenewerevalidatedby8certifiedlaboratories,resultsshowedthatthismethodcouldspecificallydetectthebarnasegenefromtestingsampleswithsatisfactorydetectionsensitivityofabout0.1%,finerepeatab

5、ilityandreproducibility,meetingtheperformancecriteriaofstandardmethods.Thisstudyestablishedasuitablemethodfordetectionofthetransgeniccropsharboringthebarnasegene,providingtechnicalsupportforthesafetymanagementoftransgeniccropsinChina.Keywords:GMOdetectionBarnasegeneConventionalPCRReal-timePC

6、RValidation［3，4］随着转基因植物种植面积的增长，全球公众对异性检测4个层次。其中转化体特异性检测方［5］于转基因植物及其产品的安全性倍加关注，为加强法特异性最高，目前我国已经针对批准进口和在转基因生物的安全监管，保护消费者的知情权，全国内取得安全证书的转基因品种建立了完善的转化球已有50多个国家颁布实施了转基因生物标识制体特异性检测标准体系。但在检测工作中，只采用［1］度。为确保转基因生物标识制度的顺利实施，转转化体特异性检测方法进行检测非常耗时耗力。为基因生物及其产品检测方法的研究和标准化十分重了提高检测效率，通常先采用筛选或基因特异性检要。在转基因产品检测过程

7、中，PCR技术因其灵敏测方法对样品进行初步的筛查检测，然后有针对性［2］度高、重现性好等特性，应用最为广泛。以PCR的采用转化体特异性检测方法对样品进行身份鉴定。技术为基础的转基因检测，根据其检测特异性的高因此，以转基因品种中的目的基因为检测靶标建立低分为筛选、基因特异性、构建特异性和转化体特基因特异性检测标准，不仅会提高检测工作的效率，收稿日期：2013-07-04基金项目：国家自然科学基金项目（31271810），国家转基因生物新品种培育重大专项（2013ZX08012-003）作者简介