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《丝状真菌目标基因替换过程中的策略与方法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、HEREDITAS(Beijing)2007年7月,29(7):898―904ISSN0253-9772www.chinagene.cn技术与方法DOI:10.1360/yc-007-0898丝状真菌目标基因替换过程中的策略与方法1,21112王教瑜,杜新法,柴荣耀,孙国昌,林福呈1.浙江省农业科学院植物保护与微生物所,杭州310021;2.浙江大学农业与生物技术学院,杭州310029摘要:目标基因替换是基因功能分析的重要手段。随着基因组测序和转化技术的进展,该技术在丝状真菌功能基因组学中的应用越来越广泛,新的体系与方法不断建立和完善。文章在转化
2、体系、打靶载体构建、突变体筛选等方面综述了丝状真菌目标基因替换过程中的策略与方法,并对各方法的优缺点及发展趋势进行了评述。关键词:目标基因替换;丝状真菌;基因功能分析Strategiesoftargetedgenereplacementinfilamentousfungi1,21112WANGJiao-Yu,DUXin-Fa,CHAIRong-Yao,SUNGuo-Chang,LINFu-Cheng1.InstituteofPlantProtectionandMicrobiology,ZhejiangAcademyofAgriculturalSc
3、ience,Hangzhou310021,China;2.ColledageofAgricultureandBiotechnology,ZhejiangUniverstiy,Hangzhou310029,ChinaAbstract:Targetedgenereplacement(TGR)isanimportanttechniqueforgenefunctionanalysis.Withthedevelopmentofgenomesequencingandtransformation,TGRhasbeenappliedwidelytofilamen
4、tousfungi,andmanynewsystemsandapproacheshavebeenestablished.Inthispaper,strategiesinvolvedinTGRinfilamentousfungiwerereviewed,includingtransformationsystems,targetingvectorconstruction,mutantselectionandsoon.ComparedwithTGR,RNAiandothertechniquesofgenefunctionanalysiswereintr
5、oducedandreviewedaswell.Keywords:targetedgenereplacement;filamentousfungi;genefunctionanalysis目标基因替换(Targetedgenereplacement,TGR)又可分为载体构建、真菌转化、突变体筛选、表型分析称目标基因破坏或基因敲除,是基因打靶技术的一种,四个步骤。近年来,在上述过程中,一系列新的策略和指对一个结构已知但功能未知的基因,从分子水平上方法不断得到建立和完善。设计实验,将该基因去除或取代,通过分析突变体表1适合于TGR的转化体系型而明确基
6、因功能的方法。TGR技术是20世纪80年代后期在DNA同源重组(homologousrecombination,TGR依赖稳定、高效、单拷贝插入率高的转化HR)基础上发展起来的,在酵母与哺乳动物细胞中已体系。近年来,各种有效的转化方法在丝状真菌中有广泛应用[1]。随着转化技术的完善,TGR在丝状真菌[2,3]得到建立。常用的有：CaCl2/聚乙二醇法、电击功能基因研究中的应用越来越广泛,其操作过程大致法、基因枪法和农杆菌介导转化(Agrobacterium收稿日期:2006−12−06;修回日期:2007−01−26基金项目:国家自然科学基金(编
7、号:30370925),浙江省自然科学基金(编号:Y306638)和中国博士后科学基金(编号:2005038279)资助[SupportedbyNationalNaturalScienceFoundationofChina(No.30370925),ZhejiangNaturalScienceFoundation(No.Y306638)andChinesePostdoctoralScienceFoundation(No.2005038279)]作者简介:王教瑜(1978−),男,山东人,助理研究员,博士后,研究方向:丝状真菌功能基因组学。Tel:
8、0571-86404228；E-mail:jiaoyu-wang1@163.com通讯作者:孙国昌(1963−),男,博士,研究员,研究
