肿瘤体外药敏检测

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1、TumorChemosensitivityAssay肿瘤体外药敏检测技术进展及应用广西医科大学外科实验室苏承武☆肿瘤化疗药物敏感性试验是个体化治疗的基础肿瘤化疗药物敏感性试验(TCA)TumorChemosensitivityAssay将肿瘤细胞进行体外的有药培养，然后通过检测细胞活性的有关指标，判断不同药物的疗效。通过这种试验，即可确定针对个体肿瘤细胞具有最佳疗效的化疗药物或药物组合。1.肿瘤细胞的异质性(heterogeneity)肿瘤的发生具有多阶段、多基因的特点，而同一种肿瘤的基因特性和发生阶段都可能会有非常大的差

2、别；表现出在形态上和生物学功能上的极大的不同。这种肿瘤细胞的异质性已经得到越来越清楚的认识。肿瘤细胞的异质性主要表现在形态异质性：病理学上的形态多种多样。基因异质性：肿瘤的发生经历了多基因的改变，同一种基因可以有多个突变位点。如P53基因的突变位点就已发现有2000个之多。功能异质性：基因的异质性导致生物学功能的异质性。左：肠型腺癌(胃)右：弥漫型胃癌2.临床与个体化治疗化疗作为全身性治疗的手段，在恶性肿瘤的治疗中具有不可替代的地位。同种肿瘤对化疗药物具有不同的反应性，忽视个体差异仅凭经验式化疗存在盲目性，使得总体疗效不佳。

3、尤其对实体瘤，经验化疗的疗效仅为20％左右。临床需要切实可行的检测方法，在用药前筛选出敏感药物，以进行针对性较强的个体化治疗；是否进行个体化治疗成为肿瘤化疗能否成功的关键因素。050100150200250020406080100ATP-TCA指导的化疗(n=39)传统化疗(n=17)p=0,0009Weeks%Patients050100150200250020406080100ATP-TCA指导的化疗(n=39)传统化疗(n=17)p=0,0016Weeks%PatientsOverallSurvivalProgress

4、ionfreeSurvival引自KurbacherCM,CreeIA,Brucker.AnticancerDrugs.1998,9:51-57传统化疗和ATP-TCA指导的化疗的生存率比较☆肿瘤化疗药敏方法发展及简介化学治疗是肿瘤的三大治疗手段之一。近30年来，虽然某些恶性肿瘤的化学治疗有明显改善，但多数肿瘤，特别是实体瘤疗效仍不理想。这与肿瘤存在个体差异性，以及多重耐药性（MDR）等因素有关。因此如何选择有效药物，进行有的放矢的治疗早已成为化疗界所关注的问题。早在上世纪60年代已有报告，用卵巢癌组织进行药敏检测，该组病人

5、中位生存期有明显延长。化疗药敏检测已发展成为体外（invitro）与体内（invivo）两类，成为“当今癌症研究的主攻课题”之一。理想的药敏检测方法应该具备的条件操作简便，可以标准化，便于推广标本可评价率高检测敏感、可靠、客观临床相关性肿瘤化疗药敏方法发展创新方向1.标准化，精确定量（无论是用药量或细胞数等）2.对体内环境的极近模拟一、体外药敏检测（一）瘤细胞直接损害试验新鲜肿瘤标本制成单细胞悬液，与抗癌药接触1～数小时后，洗去抗癌药，加入染色剂，与未加药对照样本比较，可从瘤细胞的杀伤比例判断药物抗肿瘤效应。根据染色剂与观察

6、指标的不同，可分为：美兰法、伊红台盼蓝法、吖啶橙荧光测定法、同位素释放法等。上述试验周期短、成本低、方法简便，但准确性差，现已少用或仅作为细胞存活与否的判断方法。（二）原代瘤细胞培养体外药敏预测一般采用短期原代培养。在无菌条件下，用机械法和／或酶消化法，将新鲜肿瘤标本分离为组织块、细胞团或分散的单个细胞（视瘤组织多寡及所用培养方法而定），与各种抗癌药分别作用一定时间后，与对照组比较，可计算用药组的瘤细胞杀伤比例，测出抗癌药物敏感度。主要的原代瘤细胞培养药敏检测方法及其存在的问题药敏检测方法存在问题集落形成法（HTCA）标本可

7、评价率低，仅有40~70％。实验周期长，需要2周以上测试药物种类和数量有限操作繁琐，难以标准化阳性预测值较低，仅有40～60％四唑蓝比色法(MTT)敏感性较差，最低仅能检测500个细胞量程较小，有效量程在2.0以内细胞毒性差异染色法(DiSC)可适用标本类型不广，目前仅用于血液肿瘤人为判断因素较大，难以推广标本可评价率不高，仅有70～80％阳性预测值较低，仅有70～80％胸腺嘧啶核苷掺入法(3H-TdR)实验人员接触放射，不利于健康标本可评价率不高，仅有70～80％测试结果仅能反映少量处于增殖相的肿瘤细胞对某些药物的测试结果

8、存在假阴性原代瘤细胞培养药敏检测方法的几点提示本类方法在与其他学科的结合中仍在不断探索发展，并无完美及完全定形的技术，各方法内部尚有细化及改进方法。肿瘤细胞贴壁法、瘤细胞粘附培养法、细胞团培养法及流式细胞仪测定法等已成为细胞分子生物学技术手段，不再作为独立的药敏检测方法。一些相对简便经济的