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1、图为：25中格Ｘ16小格的细胞计数板血球计数板血球计数板的构造和使用血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的长和3宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm.计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格.但是不管计数室是哪一种构造;它们都有一个共同的特点,即每一大方格都
2、是由16×25=25×16=400个小方格组成,见图.血球计数板的使用以计数酵母菌为例(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数.(2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可.(3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.(4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内.(5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌
3、数；如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数.(6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞).(7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数.3.计算公式(1)16格×25格的血球计数板计算公式:4酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×10×稀释倍数(2)25格x16格的血球计数板计算公式:4酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×10×稀释倍数4.血球
4、计数板的清洁血球汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥.通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物.若不干净,则必须重复清洗直到干净为止.血细胞计数板的使用改良牛鲍氏血细胞计数板的使用血细胞计数板的规格较多，在我国多采用改良牛鲍氏血细胞计数板，用于目视法细胞计数。其构造如图所示（图1、2）。该器材是由长方形无色厚玻璃制成，正面观察，可见中央刻有两个计数室平台，由“H”型沟槽相隔。与计数板长轴垂直的沟槽外侧各有一条与之平行的凸出的支持柱，用以承载血盖片，支持柱的外侧仍为与
5、长轴垂直的沟槽。沿计数板长边侧面观察，可见支持柱略高于计数室平台（落差0.1mm），如将血盖片搭载于支柱上，盖片与计数室平台之间即形成0.1mm的缝隙。此时将液体充入盖片与计数室之间，则液层的厚度（或深度）也为0.1mm。在显微镜下，可见每个计数室平台上均刻有清晰的网格划线。由网格线围成的正方形区域为细胞计数区，最大正方形边长3mm，分为92个大方格，每个大方格边长1mm，面积1mm，若覆以盖片并充满液3体，液体的体积为0.1mm（0.1μl），四角的四个大方格分别以单划线分为16个方格，用作计数白细胞。位于中央的大方格，以双线分成25个中方格，每个中方格又
6、以单线划分为16个小方格，则中央大方格共分为400个小方格。用作计数红细胞及血小板。划分中央大方格的划线向其四周延伸，则除四角大方格之外的四个大方格均为条形格所分隔（图3）。各计数区的计数对象、范围和换算方法见表（表2-1）。覆盖计数室的盖玻片为专用的血盖片，长25mm，宽20mm，厚0.6mm，透明、均匀一致。使用时，用水稍微沾湿计数室两侧的支持柱，以推压法将盖片平放在计数室表面，尽量减少盖片与支柱之间的空气。用吸管吸取制备后的细胞悬液，沿盖片与计数室之间的缝隙充入计数室。在光线稍暗的视野中高倍镜下计数中央大方格的四角及中间5个中方格的红细胞数。由于划线部
7、分也占有计数室的总面积，因此对压线细胞也应列入计数，为避免重复计数或漏计，一般遵循数上不数下，数左不数右的原则（（图4））。改良Neubauer血细胞计数板的构造1．俯视图2.长轴剖面图3计数室划线4细胞计数原则表2-1血细胞计数室各计数区的计数对象、范围和单位换算计数细胞种计数面积及体计数区域换算方法（以细胞个数/L计）类积236四角四个大方格白细胞4mm,0.4mmN/4×10×10×稀释倍数2四角及中央红细胞、0.2mm，6N×5×10×10×稀释倍数3共5个中方格血小板0.02mm两侧计数室嗜酸粒细胞、四角及中央脑脊液、精子3610mm，1.0mmN
8、×10×稀释倍数5个大方格，共10浆膜腔穿刺个大方格
