细胞计数方法------细胞计数板法

细胞计数方法------细胞计数板法

ID:1611301

大小:84.00 KB

页数:8页

时间:2017-11-12

细胞计数方法------细胞计数板法_第1页
细胞计数方法------细胞计数板法_第2页
细胞计数方法------细胞计数板法_第3页
细胞计数方法------细胞计数板法_第4页
细胞计数方法------细胞计数板法_第5页
资源描述:

《细胞计数方法------细胞计数板法》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库

1、细胞计数方法------细胞计数板法实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中的细胞的数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。具体操作:1.将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板。2.将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间,静置3min,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。3.计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算:细胞数/mL=四大格细胞总数/4×10个/ml(注:当细胞很多时,可在四个格中选一定数目较

2、平均的小格,由于每大格中有16个小格,然后计左侧和上方的细胞数,求出每小格的细胞数,取平均值m,m×16即每个格的平均值。所以,细胞密度=m×16×10个/ml)说明:公式中除以4,因为计数了4个大格的细胞数。公式中乘以10因为计数板中每一个大格的体积为:1.0mm(长)×1.0mm(宽)×0.1mm(高)=0.1mm而1ml=1000ul=1000mm(注意:镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。)==============

3、==================================细胞计数板的使用一、血球计数板-基本构造血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央的一大格作为计数用,称为计数区。计数区的刻度有两种:一种是计数区分为16个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成16个小方格。

4、但是不管计数区是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由400个小方格组成。计数区边长为1mm,则计数区的面积为1mm2,每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后,计数区的高度为0.1mm,所以每个计数区的体积为0.1mm3,每个小方格的体积为1/4000mm3。使用细胞计数板计数时,先要测定每个小方格中微生物的数量,再换算成每毫升菌液(或每克样品)中微生物细胞的数量。二、细胞计数板-使用方法1.视待测菌悬液浓度,加无菌水适当稀释(斜面一般稀释100倍),以每小格的菌数可数为度。2.

5、取洁净的细胞计数板一块,在计数区上盖上一块盖玻片。3.将菌悬液摇匀,用滴管吸取少许,从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴(不宜过多),让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区,勿使气泡产生,并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上(不要使计数区两边平台沾上菌悬液,以免加盖盖玻片后,造成计数区深度的升高),然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。4.静置片刻,使细胞沉降到计数板上,不再随液体漂移。将细胞计数板放置于显微镜的载物台上夹稳,先在低倍镜下找到计数区后,再

6、转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近,观察时应减弱光照的强度。5.计数时若计数区是由16个大方格组成,按对角线方位,数左上、左下、右上、右下的4个大方格(即100小格)的菌数。如果是25个大方格组成的计数区,除数上述四个大方格外,还需数中央1个大方格的菌数(即80个小格)。为了保证计数的准确性,避免重复计数和漏记,在计数时,对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。如菌体位于大方格的双线上,计数时则数上线不数下线,数左线不数右线,以减少误差。即位于本格上线和左线上的细胞计入本

7、格,本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。见下图:即本格中计数细胞为3个。6.对于出芽的酵母菌,芽体达到母细胞大小一半时,即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2-3次(每次数值不应相差过大,否则应重新操作),按公式计算出每mL(g)菌悬液所含细胞数量。7.测数完毕,取下盖玻片,用水将细胞计数板冲洗干净,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干,放入盒内保存。三、细胞计数板-计数公式1、16格×25格的细胞计数板计算公式:细胞数/ml=100小格内细胞个数/10

8、0×400×10000×稀释倍数1、25格×16格的细胞计数板计算公式:细胞数/ml=80小格内细胞个数/80×400×10000×稀释倍数四、血细胞计数板计数的误差主要来自哪些方面?应如何尽量减少误差,力求准确?血细胞计数的误差分别来源于技术误差和固有误差。其中由于操作人员采血不顺利,器材处理、使用不当,稀释不准确,细胞识别错误等因素所造成的误差属技术误差;而由于仪器(计数板、盖片、吸管等)不够准确与精密带来的误差称仪器误差,由于细胞分布不均匀等因素带来的细胞计数误差属于分布误差

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文

此文档下载收益归作者所有

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,天天文库负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。