庆大霉素吸附机理研究及生物合成初探

《庆大霉素吸附机理研究及生物合成初探》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、华东理工大学硕士学位论文第1页庆大霉紊吸附机理研究及生物合成初探摘要儡单抱菌生产的庆大霉素大部分积累在细内，细胞壁吸附庆大霉素，对产物的输障碍，限制了细胞的生物合成的能力本文针对细胞壁的吸附特性展开系统的研究。提取了棘抱小单抱菌绛红变种的细胞壁肚聚糖。肤聚糖是细胞壁的主要成分，研究表明，肤聚糖吸附的庆大霉素占细胞壁吸附总量的90%左右。肤聚糖吸附庆大霉素的最适pH是4-9，当溶液中没有自由状态的庆大霉素存在时，肚聚糖最多能吸附庆大霉素约为88000U/g肤聚糖(干重)。金属离子能够竞争肤聚糖上的庆大霉素吸附位点

2、，镁离子和钠离子在庆大霉素浓度分别小于10U/ML和大于2000U/mL时解吸附效果最好。摇瓶发酵中添加镁离子和钠离子都能够促进庆大霉素的生产，最高的产量可以提高50%.为了更好的研究产生庆大霉素生物合成机理，筛选了小单抱菌的静息培养基。因为在静息培养基中菌体生长停止，只进行生物合成，这样可以避免生长对生物合成研究的干扰。首先筛选可溶性种子培养基。随后在筛选静息培养基的过程中发现，氮源起很重要的作用。在选氯化按为氮源时，菌体维持不好，几乎不合成庆大霉素;在选硝酸钠为氮源时，菌体维持不好，庆大霉素的合成水平也不高

3、。当以一定的比例联合使用硝酸钠和硫酸按作为氮源时，筛选得到的静息培养墓，基本符合要求。在筛选出的静息培养基中研究发现，种子中庆大霉素合成的起始时间约是48小时。关键词:庆大霉素细胞壁肢聚糖金属离子静息细胞第II页华东理工大学硕士学位论文StudyoftheMechanismofGentamicinBoundbyPeptidoglycanandPreliminaryInvestigationofGentamicinBiosynthesisABSTRACTMostgentamicn(GM)producedbymic

4、romonosporaaccumulatesinthecell,thegentamicinboundbycellwallblocksthesecretionofgentamicinandlimitsthecellularbiosynthesiscapacity.Inthispaper,thegentamicinbindingpropertyofthecellwallwasinvestigated.Cellwall(CW)andpeptidoglycan(PG)wereisolatedfromMicromonos

5、poraechinospora,respectively.PG,themajorpartofcellwal,canbindabout90%ofthetotalGMadsorbedonthecellwall.TheoptimumpHappearedtobe4-9forthebindingofGMbypeptidoglycanandthemaximumcontentofboundGMwasca.88,000U/gofdryweightofpeptidoglycanandnofreeGMwasdetectedinth

6、esolution.MetalionscancompetewithGMforthebindingsite.M犷’andNa'restrainthebindingofGMintensivelyatGMconcentrationlessthan1000U/mlandmorethan2000U/ml,respectively.Therewasa50%increaseofgentamicinpotencywhenM犷”andNa"supplementedintothefermentationbroth.Inordert

7、ostudythebiosynthesisofgentamicin,therestingcellculturesystemwasscreene氏whichcanavoidtheinfluenceofgrowthonthebiosynthesisofgentamicin.Firstly,asolubleseedmediumwasscreened.Nitrogensourceplayedimportantroleintheprocessofscreeningrestingcellculturesystem.When

8、NH4Clwasusedasthenitrogensourceofrestingcellculturesystem,thebiomasscan'tremainconstantandtherewasnobiosynthesisofgentamicin.WhenNaN03wasusedasthenitrogensource,thebiomassdecreasedandtheactivity