由于药物抗癌的选择作用

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1、前言由于药物抗癌的选择作用、个体差异性、多重抗药性（原、继发性）等因素的影响，肿瘤个体对药物的敏感性和耐药性不同，即使是同一组织学类型，分化程度相同的肿瘤对同一药物的敏感性也不同。因此，选择和确定针对个体的化疗敏感药物，既可以减少化疗的盲目性，又可以避免不必要的机体损害和多重抗药性的产生，提高治疗效率。本试剂盒是通过肿瘤细胞体外给药培养，经生物荧光系统(ATP-TCA)测定活细胞指标ATP，进而判断抗肿瘤药物的敏感性和抗性。具体而言，荧光酶在有氧条件下,可以和底物荧光素结合后催化ATP转变成AMP,并同时释放出荧

2、光（波长为562nm），测定所产生的荧光强度,可获得ATP的含量。再根据细胞内ATP含量与细胞活性状态在一定范围内呈线性关系，通过对细胞内ATP含量(10-13～10-5mol/L)的测量可计算出活细胞数量。由于采用了ATP生物荧光技术，以ATP含量作为测定细胞活性的指标，本试剂盒具有灵敏度高、特异性好、周期短、临床相关性好、可测性高等优点，并配有自动化的扫描设备、统计分析系统，检测分析方便、快捷。本试剂盒注册号：国食药监械(试)字2005第3070035号本试剂盒执行标准：YZB/国0535-2003医疗器械生

3、产企业许可证：京药管械生产许20040032号本试剂盒主要用途及适用肿瘤类型：1、体外筛选对肿瘤细胞敏感的化疗药物，为个案化治疗方案提供客观依据；2、研究和确定新的化疗方案和治疗原则；3、评估联合用药方案；4、研究肿瘤耐药机制；5、体外筛选新药；6、适用肿瘤类型：卵巢癌。试剂盒组成(可测定24种药物):组织消化酶×2瓶/冻干ATP提取液×1瓶/25ml96孔培养板×4块荧光酶-荧光素系统×2瓶/冻干培养基×1瓶/200mlATP生成抑制剂×1瓶/10ml红细胞裂解液×1瓶/25ml荧光酶工作液×1瓶/25mlAT

4、P标准×1瓶/冻干说明书1份试剂盒中不包含的试剂和材料：无菌0.15MPBSpH7.210ml无菌移液管标本浸泡液RPMI1640培养液（不含血清）无菌试剂池50ml无菌锥形塑料离心管多道加样器(200ul)无菌去离子水无菌平皿血细胞计数板台盼兰溶液细胞培养箱荧光发光检测仪1操作步骤：（以下均为无菌操作）1.1标本的处理和运送:1.1.1实体瘤标本的处理、运送为了获得足够数量的活肿瘤细胞，要切取肿瘤细胞较多、未坏死液化的部分，标本不应小于1.0克。取出标本后应立即浸入装有PBS或RPM11640培养液的无菌小瓶中

5、,并在最短时间内（3小时内）送抵实验室。标本置于标本浸泡液中浸泡15分钟。标本浸泡液配方：400u/ml庆大霉素，500ug/ml氨苄青霉素，3ug/ml两性霉素，制霉菌素125u/ml,溶解于RPMI1640培养液。1.1.2胸腹水标本的处理、运送因胸腹水中细胞数量多少不一，应尽量多收集标本，不少于500ml，按20u/ml的浓度加入肝素抗凝。1.2肿瘤细胞悬液的制备:1.2.1实体瘤²组织消化液配制：将10mlRPMI1640培养液加入到组织消化酶冻干瓶中充分混合溶解，过滤除菌，置于50ml无菌塑料离心管中待

6、用。²除去标本浸泡液,剥离肿瘤标本表面的结缔组织、纤维和脂肪，用无菌剪刀将标本剪碎成1mm3的碎块,然后将其转移至含组织消化液的离心管中。²将离心管倾斜置于37℃孵育箱中孵育1.5-3小时,每隔15-30分钟振摇一次,使其充分消化。²消化结束后用10ml吸管反复吹打消化混合液，使组织块完全分散。²洗涤细胞。加入35mlRPMI1640培养液，混匀后400g离心10分钟，去上清。如有大量红细胞（>25%），参考1.3去除。然后加入35mlRPMI1640培养液混悬沉淀物，400g离心10分钟，去上清。加入3-5ml

7、培养基混匀制备得细胞悬液。²细胞计数。吸取一定量的细胞悬液,适当稀释后台盼蓝染色计数。1.2.2胸腹水标本的制备将肝素抗凝的胸腹水标本，400g离心10分钟，弃上清。如有大量红细胞（>25%），参考1.3去除。加入30mlRPMI1640培养液混悬沉淀物，400g离心10分钟，去上清，加入3-5ml培养基混匀制备得细胞悬液。计数备用。1.2.3培养的肿瘤细胞系贴壁细胞。用0.25%胰蛋白酶、0.02%EDTA消化细胞，收集后用20ml培养基400g离心10分钟，弃上清，用3ml培养基混匀细胞，计数后备用。悬浮细胞

8、。400g离心10分钟，去上清，用3ml培养基混匀细胞，计数后备用。2.3.去除红细胞第一次离心后，去除上清，加入预冷的10ml红细胞裂解液，使细胞悬浮，冰浴5-10分钟后加入20mlRPMI1640培养液，400g离心10分钟,去上清。红细胞较多的胸腹水标本，冰浴时间延长15-20分钟，并轻摇两次。1.4加药步骤1.4.1准备待测化疗药物根据待测药物的临床使用剂量及其所