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1、体外循环血清孵育及NAC干预对血管内皮细胞凋亡的影响作者：曾祥君,肖颖彬,王学锋,陈林,钟前进单位：第三军医大学新桥医院全军心血管外科中心,重庆400037 提 要:目的 观察体外循环(cardiopulmonarybypass,CPB)血清对培养血管内皮细胞凋亡的影响及N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)的干预作用。方法 采用CPB血清致伤培养血管内皮细胞模型,以TUNEL方法及流式细胞术观察培养血管内皮细胞凋亡的改变。结果 CPB血清可致培养血管内皮细胞凋亡明显增加,0.1、1mmol/LNAC减少CPB血清诱致的培养内
2、皮细胞凋亡,10、100mmol/LNAC加重CPB血清诱致的培养内皮细胞凋亡。结论 CPB血清诱致培养血管内皮细胞凋亡增加,低浓度NAC对CPB血清诱致的内皮细胞凋亡有保护作用,高浓度NAC加重CPB血清诱致的内皮细胞凋亡。 关键词:血管内皮细胞;体外循环;N-乙酞半胱氨酸;凋亡 中图法分类号:R322.12;R329-33;R329.28 文献标识码:AEffectofNAConapoptosisinducedbyCPBserumofinvitroculturedendothelialcellsZENGXiang-jun,XIAOYing-bi
3、n,WANGXue-feng,CHENLin,ZHONGQian-jin(DepartmentofCardiovascularSurgery,XinqiaoHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400037,China) Abstract:Objective ToobservetheeffectofNAContheapoptosisofculturedendothelialcellsinducedbyCPBserum.Methods Theendothelialcellswereco-cultu
4、redwithserumbeforePBC,serumafterPBC,serumafterPBCaddedwithNAC(0.1,1,10,100mmol/L).TheapoptosisofculturedendothelialcellswasdetectedbyTUNELtechniquesandflowcytometry.ResultsThepoptosisofculturedendothelialcellswasincreasedbyserumafterCPB.NAC(0.1,1mmol/L)inhibitedtheapoptosisofcultu
5、redendothelialcellsinducedbyCPBserum,whileNACattheconcentrationof10,100mmol/Lincreasedtheapoptosis.Conclusion ProperconcentrationofNACisimportantinpreventingtheendothelialcellsfromapoptosisinducedbyCPBserum. Keywords:vascularendothelium;cardiopulmonarybypass;N-acetyl-L-cysteine;a
6、poptosis 体外循环导致全身炎症反应,N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)可补充细胞内还原型巯基库,对抗氧自由基的细胞损伤作用,从而缓解体外循环后全身炎症反应。既往研究证明,炎症反应时氧化应急可以诱导细胞凋亡,然而NAC对体外循环诱致的血管内皮细胞凋亡的影响尚少见报道。为了更好地保护体外循环后的血管内皮细胞,减轻血管内皮细胞损伤,本实验观察了体外循环血清孵育及NAC干预对培养血管内皮细胞凋亡的影响。1 材料与方法1.1 主要试剂、器材 RPMI1640(Gibco,美国),小牛血清、NAC(Sigma,美国),PCD
7、凋亡检测试剂盒(德国宝灵曼公司),2300型恒温CO2孵箱,流式细胞仪及真彩色医学图像分析仪等。1.2 血清来源 研究对象为2006年3月在我院接受心脏手术的5例先天性心脏病患儿,体外循环前及体外循环结束时无菌分离血浆,离心,去纤维蛋白原,得血清,-70℃冷冻贮存备用。1.3 人脐静脉血管内皮细胞培养及鉴定 采用姚磊等[1]介绍的胎儿脐静脉内皮细胞培养法。实验用融合后1~2d的血管内皮细胞。内皮细胞的鉴定采用辣根过氧化物酶抗辣根过氧化物酶法(PAP法),检测Ⅷ因子抗原。1.4 实验分组 ①CPB前血清孵育组;②CPB后血清孵育组;③含0.1mmol/
8、LNAC的CPB血清孵育组;④含1mmol/LNAC的CPB血清孵
