液相色谱基础知识简介

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1、液相色谱基础知识简介色谱法简介色谱法的历史色谱法的原理色谱法的分类HPLC简介液相色谱图术语解释主要内容什么是色谱色谱法的简称(又叫色层法,层析法),其本质是一种分离分析方法常见的分离方法–蒸馏–离心–电泳–过滤–超滤–色谱：目前最有效的分离方法Chromatography的由来100多年前俄国植物学家Tswett分离植物色素时采用的实验方法，他将植物色素的石油醚提取液倒入装有碳酸钙的直立玻璃管,再加入石油醚使其自由流下,结果色素中各组份互相分离形成各种不同颜色的谱带Tswett用希腊语chroma(色)和graphos(谱)描述他的实验方法，即现在的Ch

2、romatography(色谱法)Chromatography的发展1906年正式命名(见诸文献)20世纪30年代开始广泛研究和应用-主要是气象色谱的应用高效液相色谱法的广泛应用始于20世纪70年代Chromatography的原理–是利用混合物中各组份在不同的两相中溶解,分配,吸附等化学作用性能的差异,当两相作相对运动时,使各组分在两相中反复多次受到上述各作用力而达到相互分离–两相中有一相是固定的,叫作固定相(StationaryPhase),有一相是流动的,称为流动相(MobilePhase),流动相又叫洗脱剂,溶剂相(Phase):–物理化学术语,特

3、指在某一系统中,具有相同成分及相同物理、化学性质的均匀物质部分。各相之间有明显可分的界面Chromatography的原理分离是一个物理过程。固定相(StationaryPhase)流动相(MobilePhase)进样(Injection)洗脱(Elution)相互作用(Interaction)色谱法的分类按分离过程的机理分:吸附色谱(AbsorptionChromatography)–根据样品组分对活性固定相表面吸附亲和力的不同实现分离分配色谱(PartitionChromatography)–分离基于样品组分在固定相和流动相中的溶解度(分配系数)不同离

4、子交换色谱(IonExchangeChromatography)–根据样品组份离子交换亲和力的差异分离,简称离子色谱(IC)体积排除色谱(SizeExclusionChromatography)GPC(GelPermeationChromatography)–固定相是疏水性凝胶,流动相是有机溶剂GFC(GelFiltrationChromatography)–固定相是亲水性凝胶,流动相是水溶液色谱法分类示意图液相色谱的分类按流动相和固定相的相对极性分:正相色谱(NormalPhaseChromatography)：固定相的极性大于流动相反相色谱(Rever

5、sedPhaseChromatography)：固定相的极性小于流动相有机化合物的极性：分子间作用力(静电引力,偶极力,色散力,氢键力…)综合表现的一种描述常见有机溶剂的极性示例高效液相色谱简介高效液相色谱法HPLC(HighPerformanceLiquidChromatography)–是一种区别于经典液相色谱,基于仪器方法的高效能分离手段:高性能色谱柱,高精度输液泵,高灵敏度检测器…HPLC流程液相色谱图名词术语色谱峰(Peak):色谱柱流出组分通过检测器时产生的响应信号峰底(PeakBase):峰的起点与终点之间连接的直线峰高(PeakHeight

6、):峰最大值到峰底的距离切线峰宽(PeakWidth):在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离半(高)峰宽(PeakWidthatHalfHeight):通过峰高的中点作平行于峰底的直线,其与峰两侧相交两点之间的距离液相色谱图名词术语峰面积(PeakArea):峰与峰底之间的面积,又称响应值标准偏差(σ)(StandardError):0.607倍峰高对应峰宽的一半拖尾峰(TailingPeak):后沿较前沿平缓的不对称峰前伸峰(LeadingPeak):前沿较后沿平缓的不对称峰鬼峰(GhostPeak):并非由试样所产生的峰,亦称假峰液相色谱图名

7、词术语基线(Baseline):在正常操作条件下,仅由流动相所产生的响应信号基线飘移(BaselineDrift):基线随时间定向的缓慢变化基线噪声(N)(BaselineNoise):由各种因素所引起的基线波动谱带扩展(BandBroadening):由于纵向扩散,传质阻力等因素的影响,使组分在色谱柱内移动过程中谱带宽度增加的现象液相色谱图名词术语死时间(t0)(Deadtime):不被固定相滞留的组分,从进样到出现峰最大值所需的时间保留时间(tR)(Retentiontime):组分从进样到出现峰最大值所需的时间死体积(V0)(Deadvolume):

8、不被固定相滞留的组分,从进样到出现峰最大值所需的流动相体积保留体积