大肠癌、胃癌PTEN基因编码蛋白表达及其相关因素的研究

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1、中国医科大学博士学位论文大肠癌、胃癌PTEN基因编码蛋白表达及其相关因素的研究姓名：李晓玲申请学位级别：博士专业：肿瘤学指导教师：辛彦2003.4.1中文摘要前言胃癌、大肠癌是消化道发病率很高的两个恶性肿瘤，且发病率和死亡率呈上升趋势。肿瘤细胞生长的无限性和浸润转移是肿瘤的最重要特征，是胃癌、大肠癌治疗失败导致死亡的主要原因。而肿瘤细胞的生长及浸润转移受多种癌基因和抑癌基因的调控。PTEN是近年来发现的肿瘤抑制基因，编码一种具有蛋白磷酸酶和磷酸酯酶双特异性功能的蛋白质。其磷酸酯酶功能是使PIP3去磷酸化，而PIP3是胰岛素和表皮生长因

2、子等细胞生长因子及其受体在细胞内的第二信使。FFEN通过降低PIP3水平，抑制AKT活性，从而抑制细胞生长、促进细胞凋亡。PTEN的蛋白磷酸酶活性是使FAK去磷酸化，FAK是整合蛋白介导的信号传导和细胞周期进展的关键分子，PTEN通过抑制FAK介导的细胞浸润、转移及生长，从而抑制肿瘤的浸润和转移。有研究显示PTEN在大肠癌及胃癌中均有不同程度的表达降低或缺失。EGFR／erbB一1、HER2／erbB一2是I型RTKs成员，具有内源性酪氨酸激酶活性的跨膜蛋白，这种激酶活性决定细胞多种生物学功能如细胞生长、分化、运动及生存等。EGFR家

3、族的主要信号传导通道是Ras—raf—MAP—kinase通道，另一个重要通道是通过PI一3一Kinase和其下游的蛋白激酶Akt(PKB)通道。当受体与高亲和性的配体结合后，EGFR形成同二聚体或与EGFR家族其它成员形成异二聚体，导致内源性酪氨酸蛋白激酶激活，酪氨酸自磷酸化，最终引起一系列反应，将信息传递给细胞内的转录因子从而影响相关基因的功能。由于表皮生长因子受体家族是细胞信号传导的中心环节，认识到针对信号传导异常环节进行治疗的重要性及可行性。目前，一些针对1型受体酪氨酸激酶的靶向治疗已应用于临床，因而确定癌组织酪氨酸激酶受体表

4、达及基因状况，筛选适于该项治疗的病例，实施个体化的治疗显得尤为重要。ECD是介导同质细胞问黏附的一组跨膜糖蛋白，主要分布在上皮细胞，是建立与保持上皮细胞极性和细胞间紧密连接的关键分子。钙粘蛋白表达增高，癌细胞间连接紧密，使癌细胞不易脱落转移，当其表达下调或缺失时将使同型细胞无法相飘粘连，这有利于肿瘤浸润性生长岛转移。已有璎究焱鼹ECD异常表达与霉癌的进展有关。躁的观察大肠癌P'IEN基因编码蛋白产物表达以及EGFR、C—erbB一2蛋白表达及其基因扩增状态。眈较分析大肠癌PTEN蛋臼表达与EGFR、e—erbB一2表达的关系，探讨基因

5、扩增在预测大肠癌靶向治疗的意义。另外对参与浸润转移的燕要细胞黏附因子ECD及PTEN蛋白在胃癌组鳜中表达的研究，探讨其在胃癌浸润转移中的作用及与胃癌生物学行为和预后的关系，期望发现预测胃癌浸润转移的分子生物学指标，为临床治疗提供科学依据。方法收集122例大肠癌术詹病例资料及常规石腊包埋标本，采用SABC方法检测大肠癌缓织书PTEN、EGFR、C—erbB一2蛋盎懿表达。应罴双色标记的FISH方法对EGFR、C—erbB一2免疫组化染色阳性的20例大肠癌标本进行基因扩增检测，随撬选择lO铡溺性癍铡傲为对照进褥EGFR、C—erbB一2的

6、FISH分析。另收集100例外科手术切除胃癌石腊包埋标本，采兵lSABC方法捡溅黉瘗缰织trrEN蛋龟及ECD的表达。络果1．PIEN骚自在正常大肠粘膜上皮细胞中均呈阳性表达。癌细胞中表达部缎一簸褒缨貔核及缨脆核膜上，少数病爨阕时有缨胞浆瓣藤性表达，PTEN异常表达率为65．57％，其中表达下调率为58．20％，表达缺失率为7．38％。这静异常表达与大肠癌缝缓学类型、Dukes分麓及淋遨结转移密留相关(P<0．05)。2+在大肠癌缰织孛，EGFR蛋是可在缀慈浆及缨胞貘串表达，鬻馁表达率为44．26％，膜表达率为11．48％。多数阳性表

7、达的癌细胞常呈巢状分布，EGFR表这与辨瘸组织挲类型密切耱关≤P<0。05)，僵与PTEN蛋自表达无密切相关关系(P>0．05)。而只有3例C—erbB一2呈阳性表达，阳性·2·率为2．46％。其中2例为高水平表达，且伴PTEN蛋白表达明显下调。3．对17例大肠癌IHC检测EGFR呈膜表达及部分胞浆表达的病例进行FISH分析，在仅有的一例IHC3+病人癌组织中，可见EGFR基因扩增，且DM、HSR两种不同形式的扩增同时存在；9例IHC2+病例中，有两例可见核内多倍染色体信号，无基因扩增。其余7例同正常粘膜上皮细胞，未见基因扩增。另外，

8、对C—erbB一2免疫组化结果阳性的三例进行FISH分析后，显示强阳性表达的2例均呈HSR形式基因扩增，IHCl+者无基因扩增。4．PTEN蛋白、ECD在非癌胃黏膜中均呈阳性表达。胃癌组织中PTEN蛋白低于周围正常胃黏膜