凡纳滨对虾过敏原活性评价及其抗原决定簇的初步表征

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1、中国海洋大学博士学位论文凡纳滨对虾过敏原活性评价及其抗原决定簇的初步表征姓名：郭永超申请学位级别：博士专业：食品科学指导教师：林洪200906015．运用体外模拟胃肠液消化模型评价的Pena1在胃肠液消化的过程中分解成了33kd、23kd、14kd的蛋白质片段，这些酶解片段在消化液中可以稳定存在达l小时以上且均有致敏活性。在反应进行到60分钟时，胃液和肠液中的Pena1的致敏活性仅降到了45％和30％。6．在国内外首次利用生物信息学方法预测Penal的抗原表位，得到了9个可能的抗原决定簇位点，它们分别位于Pena1的40—48、5卜63、75—86、136—150、163-179、1

2、91～204、216-228、242-255、262—282的肽段上。实验综合运用了多种预测方法预测了Pen81的二级结构与蛋白质表面特性，并对多个指标进行综合分析，基本构建了预测过敏原B细胞结合位点的一个分析预测体系。7．对预测所得的抗原表位进行了合成与活性鉴定，鉴定的结果表明HY～1、HY一2、HY-4、HY一6、HY一8、HY-9共6条抗原肽具有过敏活性，预测成功率66，67％。抗原决定簇在Pena1上暴露情况的检测结果表明6条活性抗原肽在Pella1表面均有分布，HE4、、HY-9的肽段上可能存在多个IgE结合位点并有部分表位可能隐藏。Penal上抗原表位均具有较强的抗微波的

3、能力，其中HY4～HY-9肽段上的表位抗微波能力最强，在微波达到10min时仍保持微弱的致敏活性，怀疑与其独特的立体结构有关，这些表位的特性在一定程度上揭示了Pena1抗加工的内在机理。综上所述，通过系统暴露途径建立的小鼠致敏模型无法绝对避免对蛋白质的假阳性致敏，建议建模时不使用佐剂且需多设置实验样本数以确保评价结果的准确性和可靠性但是该模型的优点是构建方法简单、构建周期较短；口服暴露评价模型更接近人体致敏的途径，同时有效地消除了系统暴露模型的假阳性致敏的缺陷，不足之处是建模周期较长：过敏体质小鼠模型的优点在于体质特征上和过敏人群更加接近，从而使评价结果最大限度的接近人体临床情况，但

4、是构建的成功率不高；肥大细胞体外评价模型无需冗长的动物致敏过程，可作为现有评价体系的一个有益的补充，但是对操作要求相对较高。构建的这些活体评价模型各有其优缺点，可根据实际情况进行选择搭配使用。结合生物信息学的方法来预测凡纳滨对虾过敏原的抗原决定簇是可行的，可以在一定程度上节省筛选的劳动强度，但是仅限于线性表位的研究。关键词：虾、过敏原、动物模型、抗原决定簇StudyontheaIIergenicityevaIuationofshrimptpenaeusvannaBei)alIergenandpreliminaryexosyndromeonepitopeAbstractWjtllthe

5、developmentofmodembioteclmologyandthegrowinginternationalfoodtrade，foodallergyisbecomingseriousincreasingly．InordertopreventandcontroltheoGGulTenc,eoffoodallergy,theevaluationofallergensandrelevantstudyneedtobedevelopedurgently．Atpresent,theevaluationsystemoffoodallergenspromulgatedbyFAO／WHOsti

6、llneedstobeconsummated．Especiallytheanimalmodel，therearenostandardanimalmodelsandunifiedmethods，now．Inthispaper,theanimalmodelssensitizebYshrimpallergenswerestudiedinordertocreateeconomicandpracticalevaluationmodels．Inordertoexploreallergymechanismsdeeply,shrimpallergensepitopeswerestudiedbybio

7、informaticsandthecharacteristicsofepitopeswererecordedpreliminary．TheBALB／cmicemodelsensitizedbysystemexposureWasbuilt．Theresultsshowedthatsubcutaneousinjectionwasbetterwaytoresultinhigherantibodytiters，IgEtitercouldreach26，butthe