实时荧光PCR在β地中海贫血基因诊断中的应用

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1、中山大学硕士学位论文实时荧光PCR在β地中海贫血基因诊断中的应用姓名：高华申请学位级别：硕士专业：人体解剖与组织胚胎学指导教师：何蕴韶2003.5.21实时荧光PCR在e地中海贫血基因诊断中的艘用摘要t3魂中海贫瓶(134halassemia，简称8遣贫)是整羿上最常见单基潮遗传瘸之一，广泛分布予地中海、菲洲、东南甄等地区，在我阑南方也有很高的人群携技术是成功的预防策略得以实现的基础。本研究綦于实时荧光PCR法建疵了一种13遗贫基鞠突交静有效检测方法，针对孛黼久中突变频率会计达翔93．3％懿五耱突变基因型，共检测1

2、3地贫患者348例、磁常对照107例，标本均通过反向点杂交检测，部分经铡序验证。检测结聚，实时荧光PCR法的灵敏凌和特异液均达蓟100％，所有检测巾未出现假阳性犟Ⅱ假阴性。另外，本研究建立了基于新鲜外周觚单个淋巴耋Il

3、胞的单细胞模溅，采用巢式实时荧光PCR技术，针对中国人中最常觅戆鼹型13媲贫基爨突变，检测了225个单缨腿，扩增效率为95。7％～100％，等像基因缺失率为6．5％～9．1％，假阳性率为4．5％。简而言之，实时荧光PCR法能够j螽邃、准确签定鲶大多数中国久13遣贫鏊嚣墼，麓瑰短稔测技术耀毙，实对荧光

4、PCR法是一种适念于大规模人群筛查和产前诊断的、可倍度好、自动、黼通量的等位基因突交检浏技术。关键调：§魏中海贫巍，突变薅查，实楚荧巍PCR—————————————窭堕耋查!笾望幽主童茎垒薰里堡堑塑塑壅里ApplicationofFluorescentReal-TimePCRinGeneDiagnosisof13一ThalassemiaMajorM．Sc．CandidateHumanAnatomyGaoHuaSupervisorProf．HeYun-shaoABSTRACT"thalassemia,oneofth

5、emostcommonmonogenicinheriteddisordersworldwide，hasbeenfoundinnunqerousareasincludingtheMediterranean,AfricaandSoutheastAsia．HighfrequencyinpopulationalsoshowsintheSouthofChina．B-thalassemiaisakindofhemolyticanemiaresultingfromgenedefectionsinthe§-globingenecl

6、usterthatreducestheB-globinchainproduction．Morethan170mutations，SOfar,havebeenfoundin§-globingeneclustef’whileabout30mutationsexistinChineseoriginals．S-thalassemiasyndromepresentsvariousclinicalmanifestationsandnospecialtherapyCanbeavailabletodate．Themutations

7、creeninginlargepopulationandprenataldiagnosisaiming协preventthebirthofaffectedfetalwithmajorsyndrome躺thekeytodecreasetheincidence．Furthermore，convenientandvalidgenotypingtechniqueisthebasistorealizepreventionstrategysuccessfully．BasedOUthefluorescentreal—timepo

8、lymerasechainreaction(PCR)assay,anefficientmethodwasdevelopedtodiscriminatealIdesinordertodetect5kindsofallelemutationsaccountingfor93．3％ofB·globinallelesintheChinesepopulation．DeterminedbyreversedotblotmethodtotallyandDNAsequencingpartly,348casesof8。thalassem

9、iasyndromesand107casesofnormalcontrolsweredetected．Inthisresearch，thefluorescentreal-timePCRassayreached100％insensitivityandspecificitywithneitherfalsepositivenorfalsenegativeresul