大肠杆菌yihE基因调控机制的研究

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1、TheregulatorymechanismofyihEgeneinAdissertationSubmittedtoYunnanUniversityinfulfillmentoftherequirementfortheawardoftheDegreeofMasterScienceByZhaoliangLiSupervisedbyProf．TaoLuYunnanInstituteofMicrobiology,SchoolofLifeSciencesYunnanUniversity，Kunming，Yunnan，P．R．ChinaMay,2013II扉

2、页：独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人或集体已经发表或撰写过的研究成果，对本文的研究做出贡献的集体和个人均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。＼研究生签名：名翻丕盘日期：似．似论文使用和授权说明本人完全了解云南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文和论文电子版：允许论文被查阅或借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。(保密的论文在解密后应遵循此规定)研究生签名

3、：空釜塑壶导师签名：昔霄本人及导师同意将学位论文提交至清华大学“中国学术期刊(光盘版)电子杂志社”进行电子和网络出版，并编入CNKI系列数据库，传播本学位论文的全部或部分内容，同意按《中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。研究生签名：——导师签名：111日期：摘要细菌程序性死亡途径有可能成为重要的抗菌素作用靶目标。前期工作表明细菌中一种新的蛋白激酶YihE在细菌程序性死亡途径中起关键的调控作用，然而YihE的调控机制还不清楚。在本论文工作中，我们对大肠杆菌yihE基因的调控机制进行了研究。通过检测yihE和cpx系统的双重突变

4、株对萘啶酸的敏感性，发现YihE蛋白和Cpx双组份系统在同一条作用途径上。诱导表达YihE蛋白可以消除cpx突变株对萘啶酸的超敏感性，说明Cpx双组分系统在喹诺酮类药物存在下可能主要通过YihE蛋白对细菌起保护作用。但是，在其它的环境压力如紫外、丝裂霉素C和过氧化氢作用下，诱导表达YihE蛋白不能完全消除cpx突变菌株的超敏感性，说明这些环境压力的致死途径和喹诺酮类药物的致死途径不同。为了进一步了解YihE的作用机制，我们尝试寻找YihE蛋白激酶在细胞内作用的靶目标。利用大肠杆菌基因芯片检测了在正常情况下和萘啶酸处理下，yihE突变株内基因表达的变

5、化。结果表明，包括能量代谢、碳代谢、氨基酸代谢、信号传导和膜运输等途径的一些重要基因的表达都发生了变化。对其中参与细菌应激反应和表达变化显著的基因在喹诺酮类药物存在下对细菌的保护作用进行了初步研究。结果显示dps、recG、mdtL、marA、uvrC、dinG、mutH等基因对细菌具有保护作用，表明YihE的功能可能与这些基因有关。对这些基因功能的进一步研究将有助于我们探明大肠杆菌yihE基因的调控机制。关键词：yihE；超敏感性；喹诺酮；基因芯片IVAbstractBacterialprogrammedcelldeathnetworksmayp

6、rovideavaluablesourceoftargetsforantimicrobialenhancement．OurpreviousworkindicatesthatanovelproteinkinaseYihEisacentralregulatorofprogrammedcelldeathinbacteria；however,theregulatorymechanismofyihEinEscherichiacoliremainslargelyobscure．Inthepresentwork，theregulatorymechanismofy

7、ihEwasstudied．AnalysisofthesusceptibilityofyihEcpxdoublemutantstonalidixicacidimpliedthatYihEandtheCpxsystemwereinvolvedinthesamepathway．ExpressingYihEfromaninduciblepromotercouldcompensatethehypersusceptibilityofthecpxmutantstonalidixicacid．suggestingthattheCpxsystemmightmain

8、lyworkthroughⅥhEinitsresponsetoquinolonetreatment．However,Yih