发酵工艺综合实验通风模块讲义

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1、发发酵酵工工艺艺综综合合实实验验——通风发酵模块——生物工程学院生生物物秀秀搜搜集集整整理wwwww.bbbiiooo..coom生物秀论坛www.bbioo.com/bbs/生物秀实验频道——努力做您的实验助手！http://www.bbioo.com/bio101/实验目录讲义第一部分基础实验（分析检测方法）实验一淀粉质原料的水分测定2 实验二原料中粗淀粉的测定3 实验三还原糖的测定7 实验四柠檬酸的检测9 实验五蛋白酶活力的测定方法11 实验六α淀粉酶的测定方法13 实验七糖化酶的测定方法15 实验八高效液相色谱法苹

2、果酸17 第二部分专业实验实验九玉米淀粉液化及糖化18 实验十面包酵母流加培养与分批培养试验21 实验十一黑曲霉发酵生产柠檬酸实验25 实验十二糖化酶的发酵和提取实验27 试验十三中温 α淀粉酶的摇瓶发酵实验29 实验十四酸性蛋白酶固态发酵实验30 实验十五产富马酸酶菌种筛选及生物转化法制备 L苹果酸实验31 附录34 生物秀论坛——资源共享、学术交流、互助社区1 http://www.bbioo.com/bbs/生物秀实验频道——努力做您的实验助手！http://www.bbioo.com/bio101/实验一淀粉质原料

3、的水分测定水分在工业发酵中是一个极为重要的分析项目。原料中水分，对原料的品质与保存关系甚大。水分过高，原料在贮藏时容易发霉变质，影响原料的利用价值。水分测定方法一般采用烘干法，即在 100105℃烘箱中直接干燥。1 原理样品中的水分受热后产生的蒸汽压，高于空气在电热干燥箱中的分压，水分便从样品中挥发出来。样品干燥的速度取决于这个压差的大小，在此条件下失去的主要是试样中的游离水。试样的水分一般是指在 100℃左右直接干燥的情况下，所失去的总量。在此条件下失去的重量不仅是水分，还有微量的挥发性物质。2 仪器与设备（1）分析天平

4、（2）称量瓶（3）干燥器（4）电热恒温干燥箱3 测定步骤准确称取约2 克试样，置入经100l05℃干燥恒重后的称量瓶中，在100105℃烘箱中干燥34小时，取出，置入干燥器中冷却至室温，称重。再于相同温度下干燥 1小时左右，同上操作，直至恒重。计算W-W12水分（%）=´100 %W-W10式中W0：称量瓶重（g）W1：干燥前试样与称量瓶重（g）W2：干燥后试样与称量瓶重（g）4 说明（1）原料的水分测定一般需采用100105℃烘箱中直接干燥，其结果较为准确。对生产过程中的水分快速测定，可采用更高温度下干燥(如120140

5、℃)或红外灯下干燥，以缩短分析时间。（2）测定水分时，称量恒重指试样连续两次干燥后，称量之差不超过 2mg。5 参考书（1）天津轻工业学院等，《工业发酵分析》，轻工业出版社，1980年实验二原料中粗淀粉的测定1 原理淀粉经酸或水解生成葡萄糖：生物秀论坛——资源共享、学术交流、互助社区2 http://www.bbioo.com/bbs/生物秀实验频道——努力做您的实验助手！http://www.bbioo.com/bio101/酸或酶（C6 H 10 O 5 ）n+nH2 O nC6 H 12 O 6 所生成的葡萄糖用斐林

6、试剂测定。斐林试剂由甲、乙液组成。甲液为硫酸铜溶液，乙液为氢氧化钠与酒石酸钾钠溶液。平时甲、乙液分别贮存，测定时甲、乙液等体积混合。混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2NaOH+CuSO4=Cu(OH)2↓+Na2SO4所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钾钠反应，生成酒石酸钾钠铜络合物，使氢氧化铜溶解：COOK COOK CHOH CHO Cu(OH) 2+=Cu +2H 2O COOHCOO COONa COONa 酒石酸钾纳铜络合物中二价铜是一个氧化剂，能使还原糖中羰基氧化，而二价铜被还原生成一价的氧化亚铜沉淀

7、：COOKO COOK COOHHC CHOCHOH 2Cu+ +2H 2O = 2+ (CHOH) 4+Cu2O↓(CHOH) 4COO COOH （红色）CH 2OH CH 2OH COONaCOONa反应终点用次甲基蓝指示剂显示。因次甲基蓝氧化能力较二价铜弱，故待二价铜全部被还原后，过量一滴还原糖立即使次甲基蓝还原，溶液蓝色消失以示终点：O N HC (CHOH) 4+ +H 2O = +(CH ) N SN （CH 3）2Cl 32CH 2OH 次甲基蓝（蓝色）H N COOH(CHOH) 4+ +HCl (CH 

8、) N SN(CH 3) 2CH 2OH 32（无色）2 试剂2.1 斐林试剂甲液：称取69.3克硫酸铜(CuSO4∙15H2O)，用水溶解并稀释至1000毫升，如有不溶物可用滤纸过滤。乙液：称取 346克酒石酸钾钠，100克氢氧化钠，用水溶解并稀释至 1000毫升。2.2 2％盐酸溶液量取4.5毫升浓