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时间:2019-05-22
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1、2019年检验技士精选体验课 四、血液涂片制备 一张良好的血片 ①厚薄适宜 ②头体尾明显 ③细胞分布均匀 ④血膜边缘整齐 ⑤并留有一定空隙 血涂片的制备 ①手工推片法 25°~30°夹角 血滴大小、推片与载玻片间夹角、推片速度、血细胞比容。 ②厚血膜涂片法疟原虫、微丝蚴等。 五、血液细胞染色 瑞氏染色法 1.染料组成 染料组成 酸性染料伊红(E-)钠盐阴离子 第20页 碱性染料亚甲蓝(M+)氯盐阳离子 将适量伊红、亚甲蓝溶解在甲醇中。 甲醇的作用:一是溶解
2、亚甲蓝和伊红;二是固定细胞形态。 2.染色原理 物理吸附与化学亲和作用 ③中性颗粒 呈等电状态与E-和M+结合→淡紫红色 ④红细胞 原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁,染成较浓厚的蓝色;中幼红细胞既含酸性物质,又含碱性物质,染成红蓝色或灰红色;完全成熟红细胞,酸性物质彻底消失后,染成粉红色。 3.pH值的影响 细胞各种成分均属蛋白质,由于蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液pH而定,在偏酸性环境中正电荷增多,易与伊红结合,红细胞和嗜酸性粒细胞染色偏红,细胞核呈淡蓝色或不染色;在偏碱性环境中负电荷增多,易与美
3、蓝结合,所有细胞呈灰蓝色,颗粒呈深暗,嗜酸性颗粒呈暗褐,甚至棕黑色,中性颗粒偏粗,呈紫黑色。 ①pH<pI→Pr带正电荷多→易与E-结合→染色偏红 ②pH>pI→Pr带负电荷多→易与M+结合→染色偏蓝 磷酸盐缓冲液(pH6.4~6.8) 保证细胞受色时恒定最佳pH条件 4.注意事项 (1)血涂片干透后固定,否则细胞在染色过程中容易脱落。 (2)冲洗时应以流水冲洗,不能先倒掉染液,以防染料沉着在血涂片上。冲洗时间不能过久,以防脱色。如血涂片上有染料颗粒沉积,可滴加甲醇,然后立即用流水冲洗。 (3)染色过淡可以
4、复染,复染时应先加缓冲液,然后加染液。染色过深可用流水冲洗或浸泡,也可用甲醇脱色。 六、方法学评价 1.血涂片制备 用血量少、操作简单,是应用最广泛的方法。 疟原虫、微丝蚴等检查可采用厚血膜涂片法。 第20页 2.血液细胞染色 瑞氏染色法:最经典、最常用。对于细胞质成分、中性颗粒等可获得很好的染色效果,但对细胞核的着色能力略差。 吉姆萨染色法:对细胞核、寄生虫(如疟原虫等)着色较好,结构更清晰,但对细胞质成分的着色能力略差。 瑞-吉姆萨复合染色:使细胞胞质、颗粒、胞核等均获得满意的染色效果。
5、 瑞氏染料的质量规格用吸光度比值(rA)来评价。 新配制染料rA接近2,降到(1.3±0.1)染料即可使用。 新鲜配制的染料偏碱,须在室温或是37℃下贮存一定时间,待亚甲蓝逐渐变为天青B,贮存时间愈久,染色效果愈好。在贮存过程中,必须加塞,以防甲醇挥发和氧化成甲酸。所用甲醇须为AR级,若其中含过多丙酮,会使染色偏酸,白细胞着色不良。 七、质量控制 1.血涂片制备 血滴愈大、角度愈大、推片速度愈快,血膜愈厚,反之则愈薄。 血细胞比容增高、血液黏度较高时,采用小血滴、小角度、慢推;血细胞比容减低、血液较稀时,应
6、采用大血滴、大角度、快推。 2.血液细胞染色 染色深浅与血涂片中细胞数量、血膜厚度、染色时间、染液浓度、pH值密切相关。 血清与血浆的区别是 A.血清缺少某些凝血因子 B.血浆缺少某些凝血因子 C.血清缺少凝血酶 D.血浆缺少凝血酶 E.血清缺少纤维蛋白 『正确答案』A『答案解析』血清与血浆的差别是:血清缺少某些凝血因子,如凝血因子Ⅰ(纤维蛋白原)、Ⅱ(凝血酶原)、Ⅴ、Ⅷ等。 婴幼儿做血常规检查时,多使用的采血部位是 A.颈外静脉 B.耳垂毛细血管 C.足跟毛细血管 D.肘部静脉 E.以上都是
7、 『正确答案』C『答案解析』手指采血操作方便,检查结果比较恒定,世界卫生组织(WHO)推荐采集左手无名指指端内侧血液,婴幼儿可采集大踇趾或足跟内外侧缘血液,严重烧伤患者,可选择皮肤完整处采血。 下列说法错误的是 A.采血前要仔细检查针头是否安装牢固 B.采血前要仔细检查针筒内是否有空气和水分 C.使针头与皮肤成30°角斜行快速刺入皮肤 D.抽血时针栓可以外抽和内推 E.取下注射器针头,将血液沿试管壁缓缓注入抗凝管中 『正确答案』D 第20页『答案解析』抽血时只能外抽,不能内推。 导致溶血的因素不
8、包括 A.抽血速度太快 B.血液注入容器时未取下针头 C.注入抗凝管后剧烈振荡混匀 D.注射器干燥 E.取血后直接放入4℃冰箱 『正确答案』D『答案解析』注射器中有水会导致溶血,干燥不会。 血液标本4℃保存,可使血液分析仪 A.红细胞计数结果减低 B.红细胞分布宽度增加 C.血小板计
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