丙泊酚保护肾脏缺血再灌注损伤的分子机制研究

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1、分类导：R4密级：学位类别：科学学位d专业学位口学校代码：学号学科门类医学天洱鲁科矢垮博士学位论文DoCTORALDISSERTATIoN论文题目：丙泊酚保护肾脏缺血再灌注损伤的分子机制研究TlTLE．Molecularmechanismofpropofolinvolvedprotectionfromlschemia—ReperfusionInjuryoftheRenal一级学科：二级学科：临床医学急诊医学论文作者：杨少勇指导教师：曹书华教授导师组成员：天津医科大学研究生院二。一三年五月学位论文原创性声明0II

2、IIIIIIUlllllIIIIIY2397116本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：秘驻日期：2013年5月10日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影

3、印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口，在——年解密后适用本授权书。本论文属于不保密囱。(请在相对应的方框内打“√”)天津医科大学博士学位论文中文摘要丙泊酚保护肾脏缺血再灌注损伤的分子机制研究背景：肾脏的缺血再灌注损伤可导致急性肾功能衰竭，该病理生理过程常见于心血管手术，脏器移植手术，低血容量休克，脓毒性休克等ICU行机械通气患者也可单独发生或合并其他脏器衰竭，严重威胁患者生命。在麻醉或镇静过程中选择合适的药物对肾脏缺血再灌注损伤进行加以

4、保护尤为重要。丙泊酚是麻醉及ICU常用的镇静药物，已有报道认为可以减轻多种脏器(包括脑，心脏，肝脏等)的缺血再灌注损伤，丙泊酚对肾脏缺血再灌注损伤的保护作用及相关机制还少有研究，我们进行了细胞及大鼠在体的研究以阐述相关保护作用及分子机制。第一部分：方法：使用AntimycinA耗竭ATP处理人肾小管上皮细胞(HKC)后更换正常基质复制肾脏缺血再灌注损伤的细胞模型。研究分为：1)对照组；2)细胞与丙泊酚(20umol／L)共培养组：3)缺血再灌注损伤组；4)细胞与丙泊酚(20umol／L)共培养后给予缺血再灌注损

5、伤组。Hoechst一33258染色检测HKC细胞凋亡，MTT比色法测定各组细胞活力，荧光流式细胞术检测细胞内ROS含量，化学发光法测定各组细胞总SOD活性，TBA比色法检测细胞内丙二醛，Westernblot检测HKC细胞caspase一3的表达，ElectrophoreticMobilityShiftAssay(EMSA)检测NF—KB的表达，激光共聚焦检测HIF1．Q的表达，Western．blot检测HIF1．Q表达量。结果：ATP耗竭处理后能引起SOD活性减低，清除氧自由基减少，导致细胞活性氧(ROS

6、)产生增加，直接产物MDA水平升高，同时Caspase．3活性明显增强，细胞凋亡增加，细胞存活数量减少。反映炎症反应的NF—KB激活，丙泊酚预处理能够使缺血／再灌注情况下的HKC细胞内SOD活性的减低有所减轻，进而能够清除更多的氧自由基，使MDA和ROS产生减少，相比损伤组，丙泊酚预处理caspas．3活性及NF—KB激活有部分抑制，使HKC细胞凋亡减少。单独将细胞与丙泊酚共培养组HIF1．Q表达与空白对照组相比无差异，均处于低水平。结论：天津医科大学博士学位论文丙泊酚预处理对肾近曲小管细胞缺血再灌注损伤有保护

7、作用，其分子机制包括减轻氧自由基基损害，减少细胞凋亡，抑制炎症反应，但并没有诱导细胞自我保护机制HIF一1a表达。第二部分方法：Wistar大鼠随机分为5组：(I)对照组；(ii)假手术对照组；(iii)丙泊酚(25mg／kg／h)对照组；(iv)缺血再灌注组；(v)丙泊酚预处理后缺血再灌注组。双侧肾动脉夹闭60分钟，再灌注24小时候分别取血及肾脏组织进行损伤的评估及分子生物学分析。光镜观察肾脏病理改变，肾小管病理改变评分采用半定量方法，检测大鼠肾功能(肌酐、胱抑素C)，检测肾组织SOD及MDA水平评价氧自由基

8、损害程度。使用Westernbloting及northen．blotting分析caspas一3活性，EMSA检测NF．KB的表达，Westernbloting定量肾组织HIF．1Q。结果：模型中缺血再灌注使肾组织。肾小管上皮细胞刷状缘脱落，肾小管管腔扩张，蛋白管型明显增加，问质炎细胞浸润，组织学评分较对照组显著增高，肾功能指标血清肌酐和胱抑素C显著增加，同时肾组织SOD及MDA水平，