MAP4K4在膀胱癌中的表达及生物学意义

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1、分类号：R737．25密级：学位类别：科学学位口专业学位口◎学校代码：10062学号：2010601109学科门类：医学又肄篑科袁垮T攀鑫翔毒I鹣黼蠢羹le蠡纛鞠鞠i程蒌薹8l-Iry博士学位论文DoCTORALDISSERTATIoN论文题目：MAP4K4在膀胱癌中的表达及生物学意义TITLEExpressionandbiologicalsignificanceofMAP4K4inbladdercancer一级学科：临床医学二级学科：外科学泌尿外论文作者：马宝杰指导教师：徐勇导师组成员：杨阔乔宝民天津医科大学研究生院二。一三年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交

2、的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签妇．孙学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。本论文属于保密口，在——年解密后适用本授权书。不保密

3、一。(请在相对应的方框内打“√”)学位论文作者签名导师签名：舞辑辱'

4、哆辜，隼w¨天津医科大学博一Ij学位论文中文摘要研究背景和总体研究思路目的：膀胱癌是目前世界上第九大癌症，每年约有15万人死于膀胱癌。膀胱癌在中国的发病率和死亡率均占泌尿系肿瘤的首位，目前，中国男性膀胱癌的年发病率已达十万分之八，并呈逐年上升的趋势。约70％为表浅肿瘤(Ta、T1、Tis)，这其中有50％．70％会复发，有10-20％进展为肌层侵润性肿瘤(T2．T4)，根治性膀胱切除术后5年内约有1／3会死于膀胱癌，可见膀胱癌是一种常见且复发率及死亡率较高的疾病，从基因水平进行疾病的预防、诊断、治疗具

5、有巨大的经济及社会价值。方法首先，采用基因芯片技术对5对膀胱癌及癌旁组织的基因表达谱进行初步研究，对比癌和癌旁组织的差异基因表达，筛选与膀胱癌发生、发展相关基因。然后，采用PCR和Westernblot技术进一步从转录和翻译水平检测16对膀胱癌及癌旁组织中MAP4K4的表达情况，验证基因芯片的结果，并在156例石蜡包埋肌层浸润性膀胱癌切片中通过免疫组化检验MAP4K4的蛋白表达情况，并观察临床病理参数与MAP4K4蛋白表达水平的关系，以初步证实MAP4K4的临床相关性最后，通过慢病毒包装的MAP4K4靶向shRNA转染人膀胱癌细胞系T24，通过RT-PCR及Wester

6、nblot验证干扰效率，筛选MAP4K4靶向干扰的稳转细胞系，研究MAP4K4基因靶向干扰对膀胱癌细胞株T24生物学活性的影响：M丌检测细胞增殖能力、Transwell法检测细胞侵袭能力、流式细胞检测细胞周期或凋亡，并初步讨论发挥影响的机制。幺士甲当日木：首先通过基因芯片技术筛选出在膀胱癌与癌旁组织差异表达的基因MAP4K4，说明该基因与膀胱癌的发生或发展可能有关然后用新鲜膀胱癌及癌旁组织通过PCR及Westernblot方法验证了基因芯片的结果：即MAP4K4在膀胱癌组织中的表达无论从mRNA水平还是蛋白水平均高于癌旁组织。通过对石蜡包埋病理切片的免疫组化研究发现，M

7、AP4K4在肌层浸润性膀胱癌中普遍高表达，并且该基因高表达与淋巴血管侵犯和淋巴结转移天津医科大学博一Ij学位论文显著相关，与多发肿瘤及分期相关，在淋巴结阴性的肌层浸润性膀胱癌中是独立于病理分期的预后不良因子。这说明了MAP4K4基因具备重要了临床相关性，值得进一步研究最后建立了MAP4K4靶向干扰的稳转细胞系，显示靶向干扰该基因后细胞增殖变慢，细胞侵袭力减弱，凋亡增加。结论：MAP4K4是一个与膀胱癌发生、发展相关的基因；MAP4K4的高表达与淋巴血管侵犯及淋巴结转移显著相关，在淋巴结阴性的肌层浸润性膀胱癌中有重要的判断预后的价值；在膀胱癌细胞系中靶向干扰该基因后细胞增

8、殖减慢，侵袭减弱，凋亡增加。虽然机制尚不明确但MAP4K4初步显示可以成为膀胱癌基因治疗的靶点之一关键词：膀胱尿路上皮癌(BUC)；丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶激酶4(MAP4K4)；基因芯片；RNA干扰(RNAi)天津医科人学博士学位论文ABSTRACTObiectiveBladderurothelialcarcinoma(UC)isthemostcommonmalignancyoftheurinarytract，70％bladdercancerarenon—muscle．invasivebut50％．70％ofthemwillrecur