gp78蛋白在肿瘤组织中的表达分析及功能研究

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1、分类号：R730．21密级：学位类别：科学学位团专业学位口◇学校代码：1062学号：2010602028学科门类：理学又肄酱科矢垮Tl矗N'lIN醚￡OleALUNlVERSITY硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：gp78蛋白在肿瘤组织中的表达分析及功能研究TITLETheexpressionandfunctionalanalysisofgp78intumortissues一级学科：生物学二级学科：生物化学与分子生物学论文作者：尚永亮指导教师：朱争艳导师组成员：天津医科大学研究生院二O一三年五月学位论文原创性声明UllIII

2、IlJlllllIIIIIY2396815本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名‘v鞴日期：1／哆年孓月拥学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学

3、校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口，在——年解密后适用本授权书。本论文属于不保密团。(请在相对应的方框内打“√”)学位论文作者签名：导师签名：日期：伽13年s月)罗日日期：纱fj年钼砷目天津医科大学硕士学位论文中又丰葡晏研究目的：探索泛素连接酶E3(UbiquitinE3ligase)gp78在睾丸癌、卵巢癌、结肠癌、前列腺癌等中的表达情况，以期建立gp78表达与上述肿瘤发生、发展的关系，并评价其作为潜在的肿瘤分子标志物的可能性，为肿瘤早期诊断、肿瘤分子分型及个体化医疗提供基础。最后，研究gp78参与肿瘤发生、发展的可能机制。研究

4、方法：购买商业化的睾丸癌组织芯片、卵巢癌组织芯片、结肠癌组织芯片和前列腺癌组织芯片，根据其高通量，高密度，广泛代表性的特点，利用免疫组织化学染色方法对上述肿瘤组织中gp78的表达进行分析。利用芯片中的正常组织作为对照，分别统计芯片中正常组织和肿瘤组织中gp78的表达量和表达阳性率。进一步对芯片中肿瘤组织的病理资料如肿瘤分期、病例年龄、生存率等资料与gp78的表达率进行相关性分析，探索gp78表达的病理特征，建立gp78与肿瘤发生、发展的相关性，评价其作为潜在的肿瘤分子标志物的可能性。最后利用基因敲除技术，以结肠癌细胞系HCTll6为模式对象，建立野生型

5、细胞系．HCTll6WT和gp78敲除细胞系一HCTl16gp78KO，通过酶谱分析检测gp78敲除前后细胞表达基质金属蛋A酶(matrixmatalloproteinase，MMPs)MMP．2和MMP．9的差异。进而探索gp78参与肿瘤迁移的可能机制。研究结果：1．免疫组织化学染色结果发现，gp78在人正常睾丸组织中和睾丸癌的组织中均有表达，其中正常组织中gp78的阳性率达到40％，而在所有肿瘤组织中gp78阳性率则为49％。2．卵巢癌中免疫组化染色发现，卵巢正常组织中叶存在gp78蛋白的表达，其阳性率为22％，而肿瘤组织的平均阳性率为39％。3．

6、在结肠癌组织芯片中，所有正常结肠组织均未发现gp78的阳性染色信号，而结肠癌组织中gp78染色的阳性率为70％。4．前列腺癌芯片的免疫组化结果提供了最为明显的结果，在全部23个正常组织中均未检测到gp78蛋白的表达，在肿瘤组织中gp78的阳性率为50％。而且，在gp78阳性的组织中gp78蛋A的表达是非均一的，一部分组织表达于前列腺基细胞中，而另一部分组织表达于前列腺间质细胞中，二者比例接近。5．利用westemblotting免疫印迹技术和免疫荧光染色检测试验所用的HCTl16野生型细胞HCTl16WT和gp78敲除细胞系-gp78KO，发现gp78

7、KO细胞系中没有检测到gp78蛋白的表达，而HCTll6WT细胞系中有正常的gp78的表达，说明我们利用的细胞系是gp78基因彻底敲除天津医科大学硕士学位论文的，保证后续试验的可靠性。6．酶谱分析发现，在gp78被敲除之后，HCTll6细胞中MMP．2和MMP．9的活性均有所降低，提示gp78可能通过调节MMP的活性促进肿瘤转移。研究结论：gp78的免疫组织化学染色结果显示，gp78在正常睾丸和卵巢组织及睾丸癌和卵巢癌组织中均有表达，而且阳性率较为接近，说明gp78在这两种肿瘤组织中不适合作为检测标志物。而在结肠癌，前列腺癌中，gp78在正常组织无表达

8、，在肿瘤组织中有特异表达，说明gp78对这两种肿瘤有较为灵敏的指示作用，是潜在的肿瘤分子标志物