lcms液质联用方法开发(沃特斯培训教材)

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1、LC-MS液质联用方法开发LC-MS配置探头色谱柱分流器液相色谱仪和进样器废液或馏分收集器©2004WatersCorporation基质干扰:Loop进样InMethanolInTomatoJuice©2004WatersCorporation基质干扰:用色谱柱将基质和分析物分离InMethanolInTomatoJuice©2004WatersCorporation正离子方式或负离子方式?碱性化合物(-NH)(M+H)+2酸性化合物(-COH,-OH)(M-H)-2NHOCH3OCH3NCH3ClH3COOH

2、H3CClLinuron利谷隆+veionIbuprofen布洛芬-veion©2004WatersCorporationpH值的影响正离子方式–分析碱性化合物用有机酸调整pH值如：甲酸或乙酸负离子方式–分析酸性化合物用碱调整pH值如：氢氧化铵/氨水©2004WatersCorporationpH值的影响©2004WatersCorporationpH值的影响©2004WatersCorporation一般所用溶剂和缓冲盐溶剂缓冲盐水甲酸乙腈乙酸甲醇氢氧化胺异丙醇乙酸胺**缓冲盐浓度应不超过10mM。©2004W

3、atersCorporation溶剂和添加剂的选择•TFA（三氟乙酸）-用于分析蛋白和多肽–它能抑制ESI+电离至少0.1%。–它将很大程度上抑制ESI-电离。•TEA（三乙胺）–有丰富的m/z102离子存在（三乙胺加质子的峰）。–抑制弱碱性化合物的ESI+电离，但能提高弱碱性化合物的ESI-电离。•THF（四氢呋喃）–100%的四氢呋喃可能会着火。–当喷雾气是空气时，在APCI电离方式，不能用四氢呋喃。–腐蚀PEEK管©2004WatersCorporation不恰当的溶剂和缓冲盐•不挥发性缓冲盐(磷酸盐、硼酸

4、盐、柠檬酸盐等)－堵塞管路和探头•表面活性剂－抑制电离•无机酸(硫酸、磷酸等)－腐蚀©2004WatersCorporation用PEEK管时注意溶剂的使用•腐蚀PEEK•溶胀PEEK–HNO–DMSO3–HSO–THF24–CHCl22©2004WatersCorporation溶样的溶剂–乙腈／水利谷隆©2004WatersCorporation溶样的溶剂–甲醇／水©2004WatersCorporation溶剂的选择©2004WatersCorporation用同位素模型算同位素峰©2004WatersCo

5、rporation两种不同有机溶剂的比较©2004WatersCorporation流动相配比的影响©2004WatersCorporationHPLC等度和梯度方法比较等度LC梯度LC©2004WatersCorporation分析物溶解样品全溶解于水中样品溶解于流动相中©2004WatersCorporation流速对大气压电离的影响100APCI50PneumaticallyassistedESIRelativeintensity‘Pure’ESI00.51.01.52.0流速(ml/min)(50/50A

6、CN/H0)2©2004WatersCorporation质谱能适应的流动相流速APCI0.2-1ml/min(不用分流)ESI1-300µl/min(需要分流，约250µl进入质谱)©2004WatersCorporation分流器的连接PEEK管死体积为零的三通分析色谱柱电雾喷探头PEEK管废液池或溜分收集器©2004WatersCorporationLC流速对质谱的影响©2004WatersCorporationLC流速对质谱的影响©2004WatersCorporationHPLC色谱柱的选择LC流速一般

7、根据色谱柱规格和电离方式来确定0.5-2ml/min3.9-4.6mmi.d.0.1-0.3ml/min2.1mmi.d.40-50µl/min1mmi.d.<10µl/minCapillarycolumnAPcI0.2-2ml/minESI5-300µl/minroutinely(1ml/minpossible)©2004WatersCorporationHPLC色谱柱的影响©2004WatersCorporation色谱柱的选择•当进样量相同时，一般情况下，内径小的色谱柱比内径大的色谱柱有更高的响应。•用ES

8、I电离方式时，一般建议用2.1mm内径的色谱柱，用APCI电离方式时，用3.9mm内径的色谱柱。©2004WatersCorporation色谱柱温度变化的影响©2004WatersCorporation