间充质干细胞对狼疮鼠NZBW+F1鼠的免疫调节作用

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1、江苏大学硕士学位论文摘要目的：探讨间充质干细胞(MSCs)体外对狼疮鼠(NZBWFl鼠)的免疫调节作用以及MSCs静脉移植对狼疮鼠的治疗作用，为MSCs用于治疗系统性红斑狼疮(SLE)提供理论依据和实验基础。方法：(1)随机将NZBWF1鼠分为两组：24周龄组和32周龄组。用考马斯亮蓝法每周检N4,鼠24小时尿蛋白量。分别在24周龄和32周龄时取小鼠肾脏组织切片PAS染色观察病理。取脾脏分离淋巴细胞，分别在刀豆球蛋白A(ConA)和脂多糖(LPS)刺激下，流式细胞仪检测T、B淋巴细胞的CD69、CD28和CD86的表达和T淋巴细胞的凋亡情况。(2)分离培养纯化健康人MSCs

2、。无菌分离24周龄NZBWFI鼠脾脏淋巴细胞，在刀豆球蛋白A(ConA)束1]激下，将NZBWFl鼠脾T淋巴细胞与MSCs分别以不同比例(1：O．01，l：0．02，1：O．1)共培养，采用MTT法检测T淋巴细胞的增殖情况，用流式细胞仪检测脾脏T淋巴细胞的凋亡和CD69、CD28的表达水平，实时荧光定量PCR法检测T淋巴细胞IL．10、IFN-丫mRNA水平。(3)分离培养纯化健康人MSCs。将12只NZBWF1鼠随机分为移植组和对照组。24周龄时移植组尾静脉回输MSCs，对照组注射等体积无血清DMEM培养液。每周测体重、尿量，并用考马斯亮蓝法检测24小时尿蛋白量。移植8周

3、后处死小鼠，采用ELISA法检测血清抗ds．DNA抗体水平，取肾脏组织PAS染色观察病理，用流式细胞仪检测T淋巴细胞CD69、CD28的表达，荧光定量PCR法检测T淋巴细胞IL一10、IFN-7mRNA表达水平．江苏大学硕士学位论文结果：(1)24周龄组NZBWF1鼠T细胞CD69、CD28表达及B细胞CD69表达均高于32周龄鼠(尸O．05)，T细胞凋亡率下降(氏O．05)。32周龄组小鼠24小时尿蛋白量明显增加(P

4、5)，并呈剂量依赖性。T淋巴细胞与MSCs比例为1：O．02和1：O．1时，MSCs能抑制T淋巴细胞的凋亡(尸O．05)。T淋巴细胞与MSCs比例为l：O．Ol时T淋巴细胞凋亡和IFN．丫和IL一10mRNA表达与对照组相比无统计学差异(pO．05)。不同比例MSCs对T淋巴细胞CD69、CD28的表达均无显著影响(尸>O．05)。(3)移植组与对照组小鼠相比，24小时尿蛋白量下降(尸

5、下降(尸

6、供了一定Ⅱ江苏大学硕士学位论文的实验依据。关键词：间充质干细胞；红斑狼疮；系统性；淋巴细胞；免疫调节江苏大学硕士学位论文ABSTRACTObjectiveToinvestigateImmunoregulatoryeffectsofmesenchymalstemcells(MSCs)onT-lymphocytesofNZBWF1miceinvitro．Toexplorethetherapeuticeffectsofmesenchymalstemcells(MSCs)transplantationinNZBWFlmice．Methods(1)Applied15NZBWF1mic

7、easobservedobjectives，theyweredividedintotwogroupsrandomly：24—-week·-oldgroupand32-·week·-oldgroup．Coomassiebrilliantbluemethodwasusedtodetect24一hourproteinuriaeveryweek．Attheageof24weeksor32weeks，kidneysandspleenswereabtainedfrommice，kidneysweredyedbyPASandth