精子中性单细胞凝胶电泳在男性不育评价中的应用

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1、原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：f!生丝堕日期：关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅：本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解

2、密后应遵守此规定)论文作者签名导师签名：短旦呈堑日期：山乐大学硕士学位论文精子中性单细胞凝胶电泳在男性不育评价中的应用硕士研究生：张浩波专业：妇产科学(生殖医学)硕士生导师：邓晓惠副教授中文摘要目的研究采用精子中性单细胞凝胶电泳(SinglecellgelelectropherosisSCGE)的方法检测人类精子DNA完整性及其在评价男性生育能力方面的作用。探讨在体外受精一胚胎移植(IVF—ET)过程中，精子中性单细胞凝胶电泳检测的精子DNA完整性与胚胎质量的关系。方法(1)将受测男性的精液样本根据精液常规检查结果和以往柜关男性不育病史分为两组：精液正常组和精液异常组。采用精子中性单细胞凝胶电

3、泳(SCGE)的方法，对精子DNA损伤程度进行评估，研究两组之间有无统计学差异。(2)用促性腺激素释放激素激动剂(GnRH—a)对垂体进行充分降调节后，用高纯卵泡刺激素(FsH_HP)和人绝经期促性腺激素(hMG)进行控制性超促排卵，于用药第7天开始采用B超监测卵泡发育，根据具体情况l天或间隔l天行B超检查，据卵泡发育情况和血E：水平山东大学硕士学位论文及时调整用药剂量，当有3个或3个以上卵泡直径≥18ram时，于当晚9pm注射hCG(6000IU一10000IU)，注射后34—36小时在阴道超声引导下以负压吸引的方法收集卵母细胞，4—6小时后受精。对所用部分精液进行冷冻保存备用。在受精2天后

4、对胚胎进行形态学评估。根据胚胎质量将研究对象分为：胚胎质量良好和胚胎质量较差2组。对冷冻精液解冻后行精子中性单细胞凝胶电泳，然后进行EB染色。在荧光显微镜下放大400倍，用目镜的显微测微尺测量cometlength值。研究代表精子单细胞凝胶电泳检测的DNA完整性的cometlength值与体外受精一胚胎移植(IVF—ET)过程中的胚胎质量的关系。结果(1)精液正常组和精液异常组之间代表精子DNA完整性的cometlength值的差别具有统计学意义(u=21．783，P<0．01)。(2)在胚胎质量良好组与胚胎质量较差组两组之间的女方年龄、不孕年限、不孕原因(输卵管因素、排卵因素、不明原因)、I

5、VF尝试的次数、促排卵天数、精子密度的差别无统计学意义。所取卵子数、受精数在两组之间差别也无统计学意义。(3)但在胚胎质量良好组与胚胎质量较差组之间代表精子DNA完整性的cometlength值的差别具有统计学意义(t=4．9506P<0．01)。胚胎质量的好坏与代表精子DNA完整性的cometlength值之间存在负相关关系(r’s=一0．6364，P<0．05)-结论精子中性单细胞凝胶电泳可以检测人类精子DNA损伤，是评价男性生育能力的一种有效的检测方法。精子中性单细胞凝胶电泳检测的代表精子DNA完整性的检测结果的cometlength值与体外受精一胚胎移植(IVF-ET)中胚胎质量之间存

6、在相关性。2山东大学硕士学位论文关键词中性单细胞凝胶电泳彗星试验精子IVF—ETDNA胚胎质量山东大学硕士学位论文EVALUATEREPRoDUCTIVEABILITYoFTHEⅣ队NUSINGNEUTRALSINGLECELLELECTRoPHoRESISPostgraduated：Hao-bozhangReproductiveEndocrinologicspecialityTutor：Prof．Xiao-huiDengABSTRACTObjectiveTodetecttheintegrityofspermDNAtoevaluatereproductiveabilityofthemanusi

7、ngneutralsinglecellelectrophoresis．ToinvestigatetherelationshipbetweentheintegrityofspermDNAandembryoqualityMethods(i)Accordingtotheroutinesemenanalysisandtheinfertilehistory，thehumansemenwasdividedin