百合鳞茎淀粉磷酸化酶分离纯化及酶学性质研究

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1、园艺学报2012，39（8）：1521–1530http://www.ahs.ac.cnActaHorticulturaeSinicaE-mail:yuanyixuebao@126.com百合鳞茎淀粉磷酸化酶分离纯化及酶学性质研究*孙红梅，周兰娟，王文娟，袁思施，王春夏（沈阳农业大学园艺学院，设施园艺省部共建教育部重点实验室/辽宁省设施园艺重点实验室，沈阳110866）摘要：从兰州百合（Liliumdavidiivar.unicolor）鳞茎中分离纯化淀粉磷酸化酶（StarchPhosphorylase，SP）并研究其酶学性质。结果表明：选用3

2、0%~60%硫酸铵分级沉淀，SP纯化倍数为14.78，回收率为23%，纯化的SP亚基分子量约62.5kD；SP的最适反应体系缓冲液为pH5.0的柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液，最适反应温度为30℃，且体系中不适合加入酚类抑制剂聚乙烯吡咯烷酮（PVP）；SP不耐强酸，在中性和弱碱性条件下活性稳定，pH<5时活性较弱；在合成方向上，SP对葡萄糖–1–磷酸（G-1-P）的Km-1-12+2++2+值为2.84mmol·L；1mmol·LMg、Ca对SP活性有极显著的促进作用，K、Zn也有一定的促进-1+作用；大部分离子在高浓度（>10mmol·L）下抑制SP

3、活性，但Na随着浓度的升高，对SP活性的促-1进作用增强；10mmol·L的抗坏血酸可将SP活性提高30%。关键词：百合；兰州百合；鳞茎；淀粉磷酸化酶；纯化；酶学性质中图分类号：S682.2文献标识码：A文章编号：0513-353X（2012）08-1521-10ResearchonStarchPhosphorylasePurificationandEnzymaticPropertiesinBulbsofLilium*SUNHong-mei，ZHOULan-juan，WANGWen-juan，YUANSi-shi，andWANGChun-xia

4、（KeyLaboratoryofProtectedHorticulture，MinistryofEducation/KeyLaboratoryofProtectedHorticultureofLiaoningProvince，CollegeofHorticulture，ShenyangAgriculturalUniversity，Shenyang110866，China）Abstract：Starchphosphorylase（SP）inbulbsofLiliumdavidiivar.unicolorwaspurifiedanditsenzym

5、aticpropertieswerestudied.TheresultsindicatedthatSPactivitywasimproved14.78foldby30%–60%ammoniumsulfatefractionationwithafinalyieldof23%andasubunitof62.5kD.Theoptimalreactionbufferandtemperaturewerecitricacid-sodiumcitratebuffer（pH5.0）and30℃，respectively.However，SPwassensibl

6、etostrongacidanditwasnotsuitableforaddingphenolicinhibitors（PVP）tothereactionsystem.Theactivitywasstableunderneutralandalkalineconditions，whiledecreasedunderpH<-1-12+5.Inthesyntheticdirection，KmvalueforG-1-Pwas2.84mmol·L.Furthermore，1mmol·LMgand2++2+CapromotedSPactivitysigni

7、ficantly，KandZnalsoplayedapromotingrole.Mostionswithhigh-1+concentration（>10mmol·L）couldinhibitSPactivity，whereasNaenhancedtheactivitywithits-1concentrationincreasing.Besides，theenzymeactivityincreasedby30%whileadding10mmol·Lascorbic收稿日期：2012–03–02；修回日期：2012–06–18基金项目：国家自然科学

8、基金项目（30972023）；中国博士后科学基金项目（20090451280）；辽宁省重点实验室项目（LS2010148）*E-mail：hmbh@s