甜菜坏死黄脉病毒RNA5功能分析及甜菜抗病品种的鉴定

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1、中国农业大学硕士学位论文甜菜坏死黄脉病毒RNA5功能分析及甜菜抗病品种的鉴定姓名：李旻申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：韩成贵;于嘉林20040601一i1暇一代业人学ii}{土学位论义摘鼗摘要利用初提纯的BNYVV病毒免疫兔予锗4各了瘸毒的专化性抗血清，通过间接ELISA测定两只兔子的最适=【作浓度分掰位为3600倍和3000倍，可用于BNYVV接种试验和田闯样品分轿中对病毒的Westernblot检测。对采集自内蒙古自治区包头市甜菜照掇病田的13个灏试品种进行了田阍症状调鸯，发现肉甜抗201、DFl028、KW0149、KW9419

2、、内101、ZD204、01NSZ单7个品种抗性强，并且这7个晶耱的点杂交检测缀莱显示藩KW9419努静6个抗癜晶释辗矗捡溉不至l病毒RNA存在。夔内甜抗201和KW0149利用RT-PCR方法却能检测到病毒存在，表明这类品种虽能抑制病毒的增燕鲢不箍抵抗BNy、，v静侵入+野生型RNA5的体外转录物与含Hu3(RNAI+2+3)分离物的总RNA混合接种番杏叶片的RT-PCR稳Northemblot检测维采都表鹅，努生羹RNA5嫠够程接秘毒主体蠹复籀，莠黩ELISA检测证明含有RNA5的番杏病叶中病毒浓度高于不含RNA5病叶的病毒浓度。以Hu3+R

3、NA5溺会竣染秘Hu3单独侵染的蚤香砖姥作势毒源分捌摩擦接静裁菜缀邦，Hu3+RNA5混合接种的发病率高于Hu3单独接种的谶10％，同时利用简单快速的RT-PCR方法在甜菜根内能够检测到RNA5存谯，说明RNA5的存在可以提高接种效率。RNA5的各种编码区缺失体及ATG点突变体的转录物能在接种的番裔升片内复制，僵谯继代接种试验中帮检溅不劐缺失囊RNA5存在。因此，对野生型RNA5和其中一个突变体的5，和3，端非编码隧进行测序，比较发现3，端亭剜无明显麓异，蔼5，赣萍穰在350-353nt，364-370nt羟分别映失AAAA帮AATAAAA，推测

4、这些缺失造成了RNA5编码隧缺失突变体能够簸制但不能被包装进病毒粒子。为研究RNA5编码的P26蛋白的驻细胞定位，构建了P26-eGFP融合表达和eGFP替代P26嫠困戆RNA5载舔。阁BNYVV侵染的番杏叶片总RNA接种本生烟，10天后未接种的上郯叶片出现系统癍获，RT-PCR硷溺表弱BNYVV髓够系绞侵染奉垒潮，鸯磁楚病毒鹊增蓬移蘩强魏臻熊提供了嚣常便利的试验体系。关键词：甜菜丛根病，BNYVV．RNA5，黯种抗性鉴定，侵染性克隧巾刿农业大学硕“l。!二值论立舳st∞cti烹!群,,I——一III—————————————————————II

5、楚曼皇!!算鼎寰!!!!鼍群麓蔓曼!烹苎寰兰皇!苎苎蔓ss≈AbstractSpecificantiserumagainstBNYVVwassuccessfullypreparedbyimmunizingrabbitwithapreliminarilypurifiedvirus，whichtiter娜3．6xlO’effunatedbyindirectELISA，andcarlbeusedinwestemblotdetectionofsugarbeetsamplesbothinoculatedwithBNYVVandcollectedfromth

6、efields．Amongthe13sugarbeetcultivarsplantedinrhiziomaniafieldsofBaotou，therewere7cultivarsappearedtobestronglyresistant协BNYVVincludingNeifiankang201，DFl028，KW0149，Nell01，KW9419，ZD204and01NSZdan．Dothy’bridizationanalysisrevealedthatBNYVVCOuldnotbedetectedintherootsamplesofcult

7、ivarsmentionedaboveexce：ptforKW9419，whereasPOsitiveresultswereobtainedinsomecultivarssuch嬲Neitiankang201andKW0149byRT-PCILItsuggeststhatthisk．ndofcoltivarscaninhibitvirusmultiplicationbutnotpreventitselffromvirusinfection．觑vitrotranscriptsf如mRNA5wildtypeclonewereco-inoculated

8、intoTetragoniaexpansawiththeRNAsofHu3isolatecontainingRNAl#2and3．Fol