猪流行性腹泻病毒一步法RT-PCR检测方法的建立与初步应用

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1、2015年第36卷第10期总第487期SILIAOGONGYE猪流行性腹泻病毒一步法RT-PCR检测方法的建立与初步应用1，2341，21，21，21，21，21,21，2■于学武王珊珊曹明慧赵凤菊姚伟崔基贤刘坤洋陈瑶魏澍顾贵波（1.辽宁省动物疫病预防控制中心，辽宁沈阳110164；2.辽宁省动物医学研究院，辽宁沈阳110164；3.辽宁省畜牧兽医局，辽宁沈阳110001；4.中国兽医药品监察所，北京100081）摘要：猪流行性腹泻(PED)在全球的大流行给养猪业造成重大经济损失，为快速特异地检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)，本研究根据PEDVN基因保守序列设计

2、合成引物，通过对RT-PCR反应体系和反应条件优化，建立了一步法RT-PCR检测PEDV的方法。结果显示，该方法检测敏感性达2016拷贝/μl；对猪传染性胃肠炎病毒、猪A群轮状病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒等检测结果均为阴性，具有良好的特异性；批内变异系数为1.14%~2.15%，批间变异系数为2.46%，具有良好的重复性。应用该方法对辽宁省93份临诊病料进行了检测，样品阳性率为69.89%(65/93)，为PED的快速诊断和流行病学调查提供了有效的技术手段。关键词：猪流行性腹泻病毒；一步法RT-PCR；诊断doi:10.13302/j.cnki.fi.

3、2015.10.014中图分类号：S852.4文献标识码：A文章编号：1001-991X（2015）10-0053-04Developmentandpreliminaryapplicationofone-stepRT-PCRmethodforthedetectionofporcineepidemicdiarrheavirusYuXuewu,WangShanshan,CaoMinghui,ZhaoFengju,YaoWei,CuiJixian,LiuKunyang,ChenYao,WeiShu,GuGuiboAbstract：Theoutbreakofporcin

4、eepidemicdiarrhea(PED)intheglobalareahascausedsignificanteco⁃nomiclossestotheswineindustryinrecentyears.Inordertodetectporcineepidemicdiarrheavirus(PEDV)specificallyandrapidly,aone-stepRT-PCRmethodwasestablished,whichprimerswerede⁃signedaccordingtoNgeneconservedsequences.Thereactions

5、ystemsandconditionswereoptimized.Theresultsshowthatthesensitivityoftheone-stepRT-PCRmethodwas2016copies/μl.Thedetectionresultsofporcinetransmissiblegastroenteritisvirus,porcinegroupArotavirus,porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,classicalswinefeverviruswereallnegative,withg

6、oodspecificity.Theintra-assaycoefficientofvariationwas1.14%~2.15%;andtheinter-assaycoefficietofvariationwas2.46%,withgoodreproducibility.Atotalof93diseasedsamplesfromLiaoningProvinceweredetectedbytheone-stepRT-PCRmethod.Thepositiveratewas69.89%(65/93).Theone-stepRT-PCRmethodwasef⁃fec

7、tivefortherapiddiagnosisandepidemiologicalinvestigationofPED.Keywords：porcineepidemicdiarrheavirus；one-stepRT-PCR；diagnosis猪流行性腹泻（porcineepidemicdiarrhea，PED）是腹泻的形式发生在各年龄段猪群，以水泻、呕吐和脱水由猪流行性腹泻病毒（porcineepidemicdiarrheavirus，为特征。亚洲地区及我国在很长一段时间内通过免疫PEDV）引起的一种接触性肠道传染病。其常以暴发性接种疫苗控制PED，并取得了

8、良好的效果。然而，近几年