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《应用单引物PCR获得以Bar基因为锚定基因的转基因水稻侧翼序列》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中国水稻科学(ChinJRiceSci),2013,27(3):321-324http://www.ricesci.cnDOI:10.3969/j.issn.1001-7216.2013.03.013321应用单引物PCR获得以Bar基因为锚定基因的转基因水稻侧翼序列李道恒1马建1王云鹏1马景勇1,*(吉林农业大学农学院,吉林长春130118;*通讯联系人,E-mail:winter0106@163.com)CloningFlankingSequenceofBargenebySingle-primerPCRinTransgenicRiceLIDao-heng1,MAJian1,
2、WANGYun-peng1,MAJing-yong1,*(AgronomyCollege,JilinAgriculturalUniversity,Changchun130118,China;*Correspondingauthor,E-mail:winter0106@163.com)LIDaoheng,MAJian,WANGYunpeng,etal.CloningflankingsequenceofBargenebysingle-primerPCRintransgenicrice.ChinJRiceSci,2013,27(3):321-324.Abstract:Theinser
3、tionpositionofexogenousgenesintargetedplantgenomesareusuallyidentifiedbyadapterligation-mediatedpolymerasechainreaction,thermalasymmetricinterlacedPCR,andrestrictionsiteextensionPCRintransgenicriceresearch.However,therearevariouslimitationsinthesemethods,suchascomplexityofdesigningprimers,an
4、duseoftime-consumingandmultiple-stepprocedures.Thegoalofthepresentstudywastoestablishaneasier,andamorerapidandaccuratemethodforcloningflankingsequenceusingsingle-primerPCRintransgenicrice.Unknownflankinggenomesequencesintransgenicriceweresuccessfullyclonedusingthesingle-primerPCRmethodestabl
5、ishedinthisstudy,withthegeneastheanchorgene.Ourdatademonstratedthatthesingle-primerPCRisamorerapidandaccuratemethod,justifyingitsapplicationwidelyincloningflankingsequencesintransgenicrice.Keywords:single-primerPCR;unknownflankingsequences;transgenicrice李道恒,马建,王云鹏,等.应用单引物PCR获得以Bar基因为锚定基因的转基因
6、水稻侧翼序列.中国水稻科学,2013,27(3):321-324.摘要:确定外源基因在水稻基因组上的插入位置,是转基因水稻研究的重要内容之一。为了建立一种简单、快速、准确的获取外源基因在水稻基因组上插入位置侧翼序列的方法,结合前人TAIL-PCR引物设计的原则和经验,以转入水稻基因组中的Bar基因为锚定基因,设计了既能作为锚定引物又能作为随机引物使用的一系列单引物,应用这些单引物通过单引物PCR成功获得了外源基因在水稻基因组插入位点的侧翼序列。这种方法与目前较为常用的TAIL-PCR相比,简化了70%左右的试验步骤,节省了60%以上的试验时间,是一种简便、快捷的获得未知侧翼序列
7、的方法。关键词:单引物PCR;未知侧翼序列;转基因水稻中图分类号:Q755;Q785文献标识码:A文章编号:1001-7216(2013)03-0321-04确定外源基因在转基因水稻基因组上的整合位置,在TAIL-PCR中,锚定引物和兼并随机引物是分别即获得外源基因插入位置的侧翼序列,是转基因水稻研设计的,而在兼并随机引物的设计上,3′末端都要首先有究的重要内容。目前,通过PCR技术确定外源基因在基3~4个确定序列的碱基,之后在加入随机的兼并碱基。因组上的插入位置被广泛使用,如:Adapte
