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《从SPF鸡胚中检出内源性白血病病毒及其全基因组核苷酸序列测定与分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集从SPF鸡胚中检出内源性白血病病毒及其全基因组核昔酸序列测定与分析孔义波，姜世金#，，赵钦，孙亚妮(山东农业大学动物科技学院，山东泰安271018)[摘要〕以山东某SPF鸡场的SPF鸡胚成纤维细胞提取的基因组DNA为模板，参照已发表的序列，设计合成了8对引物，经PCR成功扩增出了8段连续的、相互部分重叠的目的DNA片段，分别连接人T载体进行克隆、测序。用DNAstar软件对测序结果进行拼接，得到了内源性白血病病毒中国株SD0501前病毒全基因组序列。比较
2、分析发现，该序列中的主要片段LTR和3个ORF编码的gag,pol、和env基因.与文献中的相应序列在核昔酸序列及其推导的相应氨基酸序列水平上的同源性在98%以上。而决定白血病亚群特异性的env基因序列与其它亚群env基因序列的同源性则显示了较大的差异。〔关健词」内源性白血病病毒;全基因组核昔酸序列;同源性分析禽白血病病毒((Avianleukosisviruses,趣的课题，为此我们进行了如下研究。ALVs)是以主要引起禽各种造血细胞肿瘤性增生为特征的一类反录病毒群。由于其中一些毒株最先1材料方法分离
3、于所谓的Rous肉瘤病毒((Roussarcoma1.1细胞SPF鸡胚购于山东省某SPF种鸡场，鸡viruses,RAVs)，因此又称为Rous相关病毒(Rous胚成纤维细胞(CEF)于含5ooCS的M199中37'Cassociatedviruses,RAVs)E'1。目前，已有A-J105写CO:培养。个亚群得到了分离鉴定。分离自鸡的ALV属于A,1.2细胞DNA的提取将CEF用0.25%的胰酶B,C,D,E和J亚群。内源性白血病病毒除包括E亚消化，2500rpm离心，收集，提取CEF全基因组群AL
4、V外(F,G,H,I亚群也为内源性，但宿主不是DNA,TE缓冲液复溶后置-20℃备用。鸡)，还包括内源性病毒(ev)位点和最近发现的中等1.3PCR引物设计及全基因组cDNA的PCR扩增重复序列EAV(内源性禽类病毒)[2.3)及ART-CH根据已发表的序列，用DNAstar软件设计了8(来自鸡基因组的禽反转录转座子)+1，以及高度重对相互重叠连续的引物，该8对引物覆盖了整合线复序列CR1(鸡重复1)[51。鸡体内的内源性反转录形基因组。DNA的全序列。扩增条件为:950C,病毒是真核生物中存在大量反转
5、录成分的例子。鸡5min;95'C，1min,50C,50s，721C，1min，共32个循体内的内源反转录病毒认为代表来自细胞内可移动环;最后72℃延伸10min,0.8%琼脂糖凝胶电泳鉴的遗传成分(转座子)的反转录病毒的进化阶段:而定PCR产物。其它成分则被认为是外源性反转录病毒退化的前病1.4PCR的克隆和测序各段PCR产物分别经琼毒体，由于突变而失去了产生感染性病毒的能力。这脂糖凝胶电泳，切胶回收连人pMD18-T载体，转些成分存在的实际意义是目前很多研究的主题。化TG1感受态宿主菌，挑取白斑克
6、隆增菌后，将筛ALV在普通鸡群中广泛存在，所造成的免疫抑选的阳性克隆交由上海生工生物工程有限公司进行制给养鸡业造成的损失不可估量。而用于疫苗制造DNA序列测定，用DNAStar软件比较PCR扩增产的SPF鸡胚是否存在内源性病毒，若存在病毒是否物的核酸序列。会通过疫苗对鸡群造成免疫抑制，这是禽病界感兴.基金项目:山东省科技攻关计划(2005GG4409001)#通讯作者，Tel,0538一8245799;Faxe0538一8245799;E一mailssjjiang@sdau.edu.cn一578一鸡白血
7、病、传染性贫血2.4测定的SDO501株cDNA全基因组序列与已发2结果与分析表的不同毒株相应序列的同源性比较及SDO501毒2.1PCR扩增结果利用8对引物以CEF全基因株的cDNA全基因结构简图将ALV/SD0501组DNA为模板进行PCR扩增反应，琼脂糖凝胶电cDNA全基因组序列与目前已发表的不同亚群毒株泳结果表明成功的扩增出了8个相应的DNA片的相应全基因组核昔酸序列经DNAstar软件进行段，其大小都与预期相符。同源性比较得知:其全基因组核昔酸序列与内源性2.2各阳性克隆的酶切鉴定结果8个PC
8、R扩增片EAV-HpcloneEAV151全基因组核昔酸序列的段的阳性克隆经碱法小量提取质粒、限制性内切酶同源百分比仅为56.0%;与J亚群HPRS103株、EcoRI和PstI双酶切鉴定，各阳性克隆的插人片ADOL7501株、NX0101株的同源百分比分别为段大小与预期的相符。86.0%,85.3%和87.70o;与A亚群RSA株的同源2.3检出的内源性白血病病毒的基因组核昔酸序列百分比为95.0%;而与内源性毒株ev-1和ev-3参照已
