PDTC对暴发性肝衰竭大鼠肝组织NFκB及其调控炎症细胞因子的影响

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1、中文摘要PDTC对暴发性肝衰竭大鼠肝组织NF．KB及其调控炎症细胞因子的影响摘要目的：暴发性肝衰竭(fulminanthepaticfailure，FHF)是一种由多种原因引起的肝细胞急性大量坏死和严重肝功能损伤所致的临床综合征。暴发性肝衰竭具有起病急，病情进展快，并发症多，治疗难度大，死亡率高，预后极差的特点，是当前肝病研究的热点和难点。其发病机制非常复杂，迄今未能完全阐明。在我国，引起FHF的病因主要是病毒性肝炎，其次是药物和中毒等因素。目前的研究认为，细胞因子网络的激活在暴发性肝衰竭的发病机制中起着重要作用。其中核因

2、子．KB(nuclearfactor-KB，NF．KB)在暴发性肝衰竭炎症反应中的重要调控作用已被证实，NF．KB是一类重要的转录调控因子，被认为是调节前炎症因子基因表达的关键成分之一，诱导炎症细胞因子、趋化因子、黏附分子、炎性酶等的表达，在多种炎症性疾病的炎症部位高度活化。已有研究证实，在肝脏炎症、纤维化、肝细胞凋亡与再生、肝脏缺血再灌注损伤等病理生理过程中均伴有NF．KB的活化，是调控肝脏病理损害重要的转录因子。肿瘤坏死因子．Q(面南ornecrosisfactor-Q，TNF．Q)、诱导型一氧化氮合酶(inducib

3、lenitricoxidesynthase，iNOS)是炎症反应的重要介质，在很多炎症反应中均有它们的活化中文摘要和表达。TNF．Q本身是NF．KB的激活剂，而NF．KB的活化又能促进TNF．a的活化和释放，形成一个恶性循环。TNF．Q和NF．KB的活化皆能诱导iNOS，从而引起一氧化氮(nitricoxide，NO)释放，形成级联瀑布效应，促进肝损伤和发展，从而引起肝细胞大量坏死。吡咯烷二硫代氨基甲酸(pyrrolidinedithiocarbamate，PDTC)是一种抗氧化剂，能特异性抑制NF．KB活化。但抑制NF．

4、KB的活化对暴发性肝衰竭病情进展的影响如何?研究甚少。本研究基于上述理论，检测D．氨基半乳糖(D—galactosamine。D．GalN)和脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)导致的大鼠暴发性肝衰竭及应用PDTC后肝组织NF．KB、TNF．Q和iNOS的表达情况，分析NF．KB与肝细胞损伤程度、TNF．Q、iNOS的关系，探讨PDTC抑制NF．KB表达对大鼠暴发性肝衰竭炎症损伤的影响及其分子机制，从分子生物学角度进一步证实NF．KB在暴发性肝衰竭炎症损伤中的作用，为临床如何调节NF．KB活性治疗暴发性肝

5、衰竭提供理论依据。方法：l研究对象：雄性清洁级Wistar大鼠60只，体重180．2009。将大鼠随机分为模型组30只，PDTC组30只。模型组腹腔注射D．GalN800mg／kg，之后立即皮内注射LPSl0pg／kg，制造暴发性肝衰竭模型。PDTC组制作FHF模型前1小时腹腔注射PDTCl00mg／kg，其余同模型组。2标本的采集和保存：分别于注药(D．GaIN+LPS)后2，4，8，12，24小时行股静脉放血处死，各时间点取模型组6只，PDTC组6只大鼠。留取血清，放血处死后立即剖腹取肝脏，取适量肝组织经10％中性甲醛

6、溶液固定，余经液氮速冻后中文摘要置．80℃冰箱保存备用。3肝组织标本采用常规HE染色：光镜下观察肝脏病理学改变。4采用免疫组化S．P法，对肝组织标本进行NF．KB、TNF．Q和iNOS的免疫组化染色。5应用全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(alaninetransaminase，ALT)和总胆红素(totalbilirubin，TB)水平。6采用酶联免疫吸附试验(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)方法检测血清中TNF．Q的表达情况。7应用硝酸还原酶法检测血清中NO的变化。8用

7、半定量反转录多聚酶链反应(reversetranscriptionpolymerasechainreaction。RT-PCR)方法研究NF．KB、TNF．Q和iNOSmRNA在两组肝组织中的表达情况。9统计学方法：所有数据采用SPSS11．5软件进行统计学处理。计量资料均以i4-S表示，计数资料均采用等级表示，采用秩和检验等统计学方法进行分析，以a=0．05为检验水准。结果：1两组动物一般状况观察：模型组随着给药时间的延长，大鼠一般状况逐渐恶化，依次出现活动减少，饮水减少，毛发竖立，精神萎靡，嗜睡等。PDTC组各时间点大

8、鼠与模型组相比情况有所好转，无嗜睡，昏迷等。2两组肝组织形态学观察：(1)肝组织大体标本观察：模型组肝脏组织随时间延长出现充血、出血点、直至大块淤斑及坏死，肝组织边缘较钝。PDTC组各时间点肝组织病变程度较模型组轻。肝组织边缘较锐利，质地柔软，随时间延长仍有弥漫性出血点，但无大块淤斑及坏死。(2)肝组织