CD63基因在小鼠围着床期子宫中的表达和调节

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1、CD63基因在小鼠围着床期子宫中的表达和调节摘要胚胎着床是一个复杂的过程，需要活化的胚泡与进入接受态的子宫内膜之间建立联系。在啮齿类动物，着床过程启动后，子宫内膜基质细胞发生广泛的蜕膜化，为接下来的胚胎及胎盘发育做准备。胚胎着床和子宫蜕膜化受到很多因素调控，但具体的分子机理仍不清楚。我们实验室利用基因表达系列分析(SAGE)技术发现，与非着床位点相比，CD63(CD63antigen)基因在小鼠的着床位点显著上调。CD63属于四次跨膜蛋白超家族，在人黑色素瘤等多种肿瘤发展中起重要作用，被称为肿瘤转移抑制因子。本实验利用原位杂交、实时定量RT-PCR、

2、Westernblot和荧光素酶活性分析等方法，研究了CD63基因在围着床期小鼠子宫中的表达与调节。CD63的mRNA和蛋白水平在妊娠第5天子宫的着床位点均显著上调，在随后第6．8天的蜕膜区，均可检测到明显的CD63mRNA表达信号。在假孕和延迟着床的子宫中，检测不到CD63基因的表达，而在延迟激活子宫的着床位点，CD63基因的表达特异性增强，其表达模式与正常妊娠第5天着床位点处类似。CD63mRNA在小鼠妊娠第6．8天的蜕膜区表达，同时在人工诱导蜕膜化的小鼠予宫中也能检测到CD63基因的杂交信号，实时定量RT-PCR也验证了此结果，提示CD63基因

3、可能在蜕膜化过程发挥作用。在切除卵巢的小鼠中，类固醇激素。对CD63在子宫内的表达没有影响。体外诱导蜕膜化中，CD63mRNA表达持续上调。CD63基因启动子上存在转录因子C／EBP13反应元件，将含有CD63基因启动子序列的报告载体转染体外培养的子宫内膜基质细胞和NIH一3T3细胞后，通过荧光素酶活性分析，表明C／EBP13能够显著增加CD63基因的转录活性。总之，CD63基因在小鼠围着床期子宫中的表达与胚胎着床过程密切相关，并受活性胚泡的诱导。CD63基因在小鼠子宫基质细胞体外蜕膜化过程中表达上调。此外，转录因子C／EBP8上调CD63基因的转录

4、活性。关键词：CD63；着床；蜕膜CD63基因在小鼠围着床期子宫中的表达和调节AbstractEmbryoimplantationisacomplexprocessinwhichthereciprocalinteractionbetweentheimplantation·competentblastocystandreceptiveuterusisessential．Aftertheestablishmenofimplantation，endometrialstromalcellsbegintOundergodecidualizationforthe

5、subsequentembryodevelopmentandplacentation．ImplantationanddecidualizationareregulatedbYmanyfactors，buttheprecisemechanismislargelyunknown．Inourserialanalysisofgeneexpression(SAGE)analysis，CD63WaSsignificantlyhigherinmouseutemsatinplantationsitesthanthatatinter-implantationsites

6、．CD63antigenbelongstOthetransmembrane4superfamily(TM4SF)，andplaysaroleinmanytumorsincludingmelanoma,SOitisknown嬲atumormetastaSissuppressorgene．Inthisstudy，theexpressionpatternandregulationofCD63geneinmouseuterusduringperi-implantationperiodwereinvestigatedbyinsituhybridization，

7、real—timePCR，westernblotandluciferaseactivityassay．OurresultsshowedthatbothuterineCD63mRNAandproteinlevelswerehighlyexpressedatimplantationsitesonday5ofpregnancy,andCD63mRNAsignalwasstronglydetectedinthedecidualzoneonthefollowingdays6-8ofpregnancy．Intheuterusonday5ofpseudopregn

8、ancyorunderdelayedimplantation，theexpressionsignalofCD