凝胶层析法分离酪蛋白与核黄素

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1、2.GelChromatographySeparateCaseinandRiboflavinbySephadexG-75Purposebasicoperationofgelchromatography(凝胶层析)principleofseparatingriboflavin(核黄素)andcaseinbySephadexG-75welcometousethesePowerPointtemplates,NewContentdesign,10yearsexperienceprinciple1.ConceptionGelchromatography, in analyticalchemis

2、try,techniqueforseparatingchemicalsubstancesbyexploitingthedifferencesintheratesatwhichtheypassthroughabedofaporous,semisolidsubstance(gel).Themethodisespeciallyusefulforseparatingenzymes,proteins,peptides,andaminoacidsfromeachotherandfromsubstancesoflow molecularweight.GelChromatographyGelFilt

3、ration(Porath,Flodin,1959)Gelpermeationchromatography(GPC)Size-exclusionchromatography(SEC)molecularsievechromatography(Hjertén,Mosbach,1962)exclusionchromatography(Pedersen,1962)2.固定相（凝胶）三维空间网状结构交联剂越多交联度越大网孔结构越紧密交联剂越少交联度越小网孔结构越疏松Sephadex®Beadsarepreparedbycross-linkingdextran(葡聚糖)withepichloro

4、hydrin(环氧氯丙烷).Widelyusedinindustrialprocesses.Alsousefulindesalting(脱盐)andbufferexchange.Sephadex的分级范围G10<700G15<1,500G251,000~5,000G-501,500~30,000G-753,000~70,000G1004,000~150,000G1505,000~400,000G2005,000~800,000吸水性*G类的型号—每克干凝胶吸水量（ml）x10*如G-75—每克干凝胶吸水量为7.5ml样品固定相流动相小分子被延滞小分子大分子较快流出moleculars

5、ieveeffect(分子筛效应)Ve-VoKd=————Vi分配系数Kd：特点：（1）与被分离物质分子的大小和凝胶颗粒孔隙的大小有关（2）与柱的长短粗细无关每个溶质分子在流动相和固定相之间有一个特定的分配系数(Kd)应用脱盐测分子量分离纯化VeAlbuminNaClVeVe优点缺点凝胶层析的优缺点凝胶是一种不带电荷的惰性载体，结构稳定要求样品和洗脱液的粘度很低操作条件较温和凝胶颗粒网络孔径大小有限,可被纯化物质的分子量范围受限制样品得率高,重复性好,可进行大量分离纯化凝胶结构对某些分子具有吸附作用(1)棉花装填量及松紧度适中；(2)凝胶不能有气泡和分层现象；(3)装柱结束后保持凝胶

6、表面平整。1.装柱使用滴管，柱床表面以上洗脱液不得流干。Notes2.洗脱3.加样(1)洗脱液液面与凝胶柱床表面相切，关闭出口；(2)加样时使用滴管，尽量不破坏凝胶表面；(3)样品进入凝胶后再加缓冲液开始洗脱。