《电镜超薄切》PPT课件

《《电镜超薄切》PPT课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、电子显微术图1日立H-7500，H-7600图JEM-2100F日本电子图4Sirion场发射扫描电子显微镜一、电子显微镜的发展史1、光学显微镜的极限光学显微镜的分辨本领大约是可见波长的一半，可见波长为400--800nm，所以光学显微镜的分辨本领大约是0.2um。2、1924年，法国科学家德.布罗意证明了任何一种快速运动的粒子，都具有波动性。1926年德国科学家布许发现，高速运动的电子在电场或磁场下，会发生折射，并且能被聚焦。高速运动的电子具有波动性和折射性是电子显微镜的基础。20世纪30年代，

2、经过鲁斯卡、克诺尔、马顿等科学家的不懈努力，终于在1938年试制成功第一台实用电子显微镜。２０世纪３０年代电子显微镜问世，６０年代电镜技术和生物样本制备技术获得进展。后发展了扫描电镜术、冷冻复型术、高压电镜术、Ｘ线显微分析术、扫描隧道显微术和原子力显微术等。二、电镜的应用：正常结构；病理诊断；病原；化学；考古。第一节、透射电子显微术一、透射电镜的原理1高速运动的并具有波动性和折射性的电子2电镜的各种像差1）球差：是由于透镜不能把所有的入射光线聚集共同的焦点而产生的。2）像散：这一缺陷主要是由于电子

3、透镜实际上不可能做得完全对称。3）色差：可见光的波长不同。4）畸变:在低倍镜时经常发生.因为图像中心部分和周边部分的放大倍数不同.二、透射电子显微镜的结构1电子枪2聚光镜系统3样品室4成象系统:物镜、第一中间镜、第二中间镜、投影镜。5观察和记录系统三、透射电镜的使用1加速电压的选择：40-100kV可以一档一档的调节。加速电压对电镜的性能有以下的影响：一般样品薄时40-60KV，一般样品60-80KV，厚时100KV。1）电压越高，电子穿透能力越强；2）对于某些生物制品，电压越高，图象反差越小；3

4、）电压升高电子枪亮度增加，荧光屏亮度也增加；4）电压升高对提高分辨率有利。2聚光镜光阑和物镜光阑的选择聚光镜光阑：200-300um;物镜光阑：20-70um.3放大倍数的选择选择放大倍数的两个原则：①感兴趣的区域充满整个照相底片；②感兴趣的细节特征十分容易测到。4．选视野、调焦和拍照（1）把要拍照的视野移至屏中心6×9黑框内。（2）用OBFOCUS调焦，拍照前使OB置于稍欠焦位置上以增加反差。（3）核对是否存有像散，核对光斑是否居中，核对灯丝是否饱和对称。（4）根据事先已在计算机上设定好的最佳光

5、强度，调节BRIGHTNESS，使PAG1上的EXPTIME为设定值（参考第三章）。（5）盖上观察窗，按下PHOTO，即自动曝光。透射电子显微镜生物制品制备技术Thephotooflightmicroscope冷冻蚀刻法超薄切片冰冻蚀刻复型术冰冻割断术FreezeetchreplicaFreezecracking电镜细胞化学术electronmicroscopecytochemistry免疫组织化学技术免疫电镜术ImmunohistochemistryImmunoelectronmicroscop

6、y电镜放射自显影术显微放射自显影技术ElectronmicroscopeAutoradiographyMicroautoradiography扫描电镜技术ScanningelectronmicroscopySEM被吞噬的红细胞现有的透射电镜生物制品制备技术分为两类：一类是透射电镜的基本制备技术，包括超薄切片和负染色法；另一类是生物制品的特殊技术，其中包括冷冻蚀刻法、冰冻割断术、电镜细胞化学术、免疫电镜术、电镜放射自显影技术、X线微区分析技术等。1、超薄切片样品的制备（1）取材(基本要求是在活体情

7、况下进行)取材的原则(快、准、轻、小、冷的原则）1）快速：1分钟之内投入固定液。2）块小：0.5-1mm3或截面1mm2的长条。3）部位准4）损伤小：器械应锐利，避免牵拉、挤压，防止组织受机械损伤。5）低温：0-4oC取材的方法1）动物材料：对神经组织等要进行原位固定或灌注固定，待组织适当硬化后再取材。胚胎干细胞的研究2）培养细胞(Cellculture)：生长在瓶中的细胞到足够的量，先倒去培养液，然后倒入适量的戊二醛固定液，在冰浴下3-5分钟、弯头吸管吹打或用软器械轻轻地刮下贴壁的细胞，将这种混

8、合液倒入离心管中，2000rpm低速离心15-20分钟，使细胞呈团，弃去上清液，换一次固定液，将其移入修块台，修快成标准块4oC固定、待用。3）单细胞悬液：精子、血球等其他不易聚集的悬浮游离材料，可加入等量的戊二醛和其他类型的固定液，轻轻地把他们悬浮在固定液中。经过固定处理后再离心成团，在50oC中弃去上清液，加入适量的经50oC预温的2%的琼浆，使团悬浮，将悬浮团和琼脂液一同在薄片上展层，固定后切成1mm3的小块。（2）固定(fixation)Theaimistoavoiddig