阿托品诱导DPPG脂质体形成交托结构

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1、维普资讯http://www.cqvip.com辫屯扭第41卷第l9期CHINESESCIECEBULLETIN④Ⅷ阿托品诱导DPPG脂质体形成交插结构73郝轶珩陈建文黄芬^——————～———————～煳词～～差嚣熟龇月／J5伪辰^傅J，十D『J)7J)交插结构可能是生物膜系统中普遍存在的种结构，它可能在膜中构成几个结构域(domain)来调节膜脂的流动性、通透性等物理性质，也可能通过改变结合于交插脂双层的膜蛋白的结构来行使生理功能0j．许多药物可以诱导非交插脂双层形成交插结构，例如可卡因和pindolol[21诱

2、导磷脂酰胆碱、山莨菪诱导磷脂酰甘油_3形成交插脂双层结构阿托品是与山莨菪碱同族的生物碱，是一种抗胆碱药物，它具有抑制腺体分泌、扩大瞳孔、解除胃肠和支气管平滑肌痉挛、解救有机磷中毒等功能本文利用差式扫描量热(DSC)和荧光标记法研究了阿托品对二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)的作用，证明阿托品可诱导DPPG脂质体形成交插结构l材料和方法1．1材料DPPG，DPH(1，6-Diphenyl—l，3，5-hexatriene)购于美国Sigma公司，hAS[一(9-anthroy—loxy1)一stearicacid，=3，7

3、，9，12]，16AP[16一(9-anthroyoxy1)一palmitcacd购于MolecularProbes公司，阿托品为中国医学科学院药物研究所提供L．2方法1．2．1DPPG脂质体的制备一定量DPPG溶于氯仿：甲醇(／5：1)中，在试管中用氮气吹成薄层，并于真空在冰箱中过夜然后加入不同含量阿托品的10mmol／LHEPES缓冲液(pH7，2)，于45℃振荡5min，即形成脂质体1．2．2差式扫描量热法cDSC)样品浓度为1mg／mL，阿托品浓度从0，2到10mmol／L，于MC一2高灵敏度DSC仪上姒60

4、C／h速度扫描，温度范围为20～5012．1．2．3DPH荧光标记法样品浓度为0．4mg／mL，阿托品浓度从0．1到2．0mmol／L，DPPG：DPH为500：1．样品于4512保温1h，在日立F4010荧光仪上测其荧光强度，激发波长为36511111，发射波长为430111111．2．4荧光偏振法样品浓度为0．5mg／mL，阿托品浓度为3．0mmol／L，DPPG与3AS，7AS，9AS，12AS和16AP等探针的比例为300：1样品于45C保温lh，在同一仪器上以不同方向的偏振光激发，激发波长为38811111

5、，发射波长为455nii1，测不同温度下的偏振光强度，按下列公式计算偏振度(P)：l9950417畋稿．1995122t)收修改稿维普资讯http://www.cqvip.com第19期科学通报IvvGI~P=，其中G=／，HH，V=90，H=02结果和讨论2．1差式扫描量热cDSC】图1是不同浓度的阿托品作用于DPPG脂质体的DSC图谱．不含阿托品的DPPG脂质体在35．20"C有一预相变峰，在41．12℃有一主相变峰(图1(a))．而含有阿托品的该脂质体预相变峰消失，相变温度下降(圉l(b)～(f))．在阿托品浓

6、度为lmmo／L时相变峰最为尖锐，表明此时的相变协同性最好图2是不同浓度阿托品对DPPG~质体相变热焙(△H)、相变温度(T)的影响．在0～1．0mmol／L阿托品浓度下，△H随阿托品浓度增加由35．5kJ／mol升至38．9kl／mol，然后随阿托品浓度升高逐渐下降，至10mmol／1基本达到饱和，此时△H为2801,3／mol(图2(a))0．2mmol／L的阿托品就可以使T迅速下降0．90"C至40．22℃；但阿托品的浓度再升高，丁的下降则变得十分缓慢，至10mmoi／L才降至3912℃(图2fb))2．2DP

7、H荧光标记以对照样品(不含阿托品)的荧光强度(F)与不同浓度阿托品的DPPG／DPH样品的荧光强度(F)的比值F／F对阿托品的浓度作图3图3中曲线1可见，在相变温度以下(25"C)，F／F埴在阿托品浓变为06～1．2mmol／L之间迅速由1．354384246r门图lDPPG脂质体／阿托品的差式扫描025l10量热图谱M托品蕺《mmoi·L。曲线(a～()的阿托品浓度分别为：o，021o，3．o．60，lOorrl『】_。I／L．DPPG浓度为图2阿托品对DPPG脂质体变的影响】0mg／mL(a)阿托品对△H的影响．

8、(b)珂托品埘T的影响维普资讯http://www.cqvip.com1790科学通报第4l卷升至2．30升并基本达到稳定F／F值升高是由于F值减少所致(数据未列出)，说明DPH在脂双层中位置发生变化，其生色团更靠近脂分子的极性头部而更易暴露于水溶液中，也就是说脂双层结构发生变化Rowe等认为这种变化即是形成交插结构，，x射线衍射也证明这点。2