不同材料诱导犬根尖形成比较探究

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1、不同材料诱导犬根尖形成比较探究　　[摘要]目的比较羟磷灰石（HA）、氢氧化钙（CH）、Vitapex诱导犬年轻恒牙根尖形成的效果。方法选用2只5～6月龄犬的16颗恒切牙，去髓后随机分为4组。A、B、C组为实验组，依次用HA、CH及Vitapex糊剂充填根管；D组为对照组，用AHplus糊剂充填。采用锥形束CT（CBCT）测量牙根长度及根尖面积的变化；制作石蜡切片行苏木精-伊红（HE）染色，观察根尖组织形态；制作冰冻切片行碱性磷酸酶（ALP）染色，观察细胞的成骨活性。结果1）CBCT结果显示：术后4周，各组牙根均较术前延长（P

2、　　[Keywords]apexification；conebeamCT；hy-droxyapatite；alkalinephosphatase；periodontalmem-brane年轻恒牙的牙根在牙髓感染或根尖感染后可停止发育。根尖诱导成形术是在消除感染的基础上，用药物诱导根尖周硬组织形成并使牙根继续发育的方法[1]，而寻找理想的诱导药物则是人们一直研究的课题。碱性磷酸酶（alkalinephosphatase，ALP）是牙齿、骨等硬组织形成、再生的重要矿化酶，其活性强弱反应了组织的成骨能力[2]，而冰冻切片ALP染色

3、是观察组织中ALP活性的经典方法。本研究拟通过锥形束CT（cone11beamCT，CBCT）影像学观察、组织形态学及酶组织化学等方法对比几种常见根尖诱导剂诱导犬根尖形成的效果，探讨牙根继续发育的可能机制，为临床根尖诱导成形术中选用有效的药物提供依据。1材料和方法1.1主要设备及材料KaVo3D-eXam型CBCT；纳米级羟磷灰石（hy-droxyapatite，HA）粉剂（AMRESCO公司，美国），甘油（分析纯，郑州化工试剂二厂），氢氧化钙（calciumhydroxide，CH）糊剂（含散剂和液剂，湖北泰辰健瑞药业有限

4、公司），Vitapex糊剂（日本森田株式会社），AHplus糊剂（Densply公司，美国）等。1.2实验动物5～6月龄健康杂种犬2只（由重庆医科大学动物实验中心提供），分别命名为甲、乙犬，雌雄各1只，体重分别为6.8、7.2kg。1.3实验方法1.3.1实验用糊剂的制备HA：纳米级HA粉剂和甘油按等体积比混合调成糊状；CH、Vitapex、AHplus糊剂等按厂家说明使用。1.3.2实验动物的处理111）术前观察：甲、乙犬分别拍摄CBCT片，证实两只犬共16颗恒切牙根尖均未发育完全，测量牙根长度及根尖面积。2）根管预备及充

5、填：用速眠新Ⅱ按0.1mL·kg-1肌注麻醉动物，质量分数0.1%氯己定冲洗口腔，将16颗恒切牙进行根管预备，然后随机分成A、B、C、D共4组，分别充填HA、CH、Vitapex、AHplus，最后用玻璃离子水门汀充填。3）甲犬的术后处理：术后4周拍摄CBCT片，测量牙根长度及根尖面积，随即麻醉下处死，取实验区域牙及颌骨，经4℃固定、脱钙、脱水、包埋后以根尖孔为中心制作石蜡连续切片，行苏木精-伊红（hematine-eosin，HE）染色。4）乙犬的术后处理：分别于术后4、8周拍摄CBCT片，测量术后4周牙根的长度及根尖面积

6、；术后8周处死动物，4个标本按甲犬的处理方法制片行HE染色，另外4个标本按杜卓民法[3]制作冰冻切片行ALP染色。1.4观察方法及内容1.4.1CBCT影像学观察采用扫描的原始数据进行三维重建，获得实验牙区域多层面的轴位、矢状位及冠状位图像。以右上颌中切牙为例（图1），分别调节其轴位、矢状位及冠状位的x、y坐标轴，其交点O为根尖位置，从矢状位测量牙根长度，并在根尖处沿与牙根长轴垂直的方向做切面，获得根尖部位的横断面形态，利用软件中的亨氏单位（hounsfieldunit，HU）统计功能，从横断面测量根尖面积。111.4.2组

7、织学观察各组的HE染色样本用于观察根尖大体形态及根尖区细胞的组成及分布，ALP染色样本用于观察根尖周区域ALP阳性细胞（细胞呈黑色染色）的分布情况。所有样本均在普通光学显微镜下观察。1.5数据处理及统计学分析所有数据重复测量3次，记录其平均值，采用SPSS12.0软件进行统计分析，统计方法采用单侧配对t检验，检验水准为双侧α=0.05。2结果2.1CBCT观察结果4组牙齿术前和术后4周的牙根长度和根尖面积见表1。术后4周，4组牙齿的根尖孔均未闭合（图2），但牙根长度与术前相比，其变化均有统计学意义（P0.05）。术后8周，因

8、甲犬已处死，样本量较小，测量数据未行统计学分析，但各组根尖横断面均显示有密度较高的闭合影像（图2），其中A组与B组、C组与D组的根尖几乎分别位于同一横断面上，为描述方便，将A组与B组、C组与D组根尖横断面影像分别合并描述。结果提示，AHplus组的根尖闭合速度慢于其余3组。2.2组织切片观