逆转录病毒载体介导针对RANKL的重组蛋白对小鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

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1、201年118日第91卷第38期NatlMedJChina．October18．2011．Vo1．91．N0_382719·．基础研究．逆转录病毒载体介导针对RANKL的重组蛋白对小鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用时建李晓花孙倍成林绪涛张兴元张帆欧琨陈强谱【摘要】目的探讨重组蛋白核因子一-cB(NF—KB)受体活化因子(RANK)．Fc对小鼠肝缺血再灌注损伤保护作用及可能的机制。方法据不同处理将小鼠随机分为无血清培养基对照组(Sham组)；目地基因病毒组(RANK—Fc组)；空载体病毒组(eGFP组)，各组均经尾静脉将2．5m1溶液(含或不含病毒)6s内注入。3d

2、后RANK—Fc及eGFP组建立70％肝缺血再灌注损伤模型，热缺血90min后再灌注不同时问，Sham组行假手术。各组均在1、3、6及24h剖杀小鼠5只，留取血清及肝组织标本。RT—PCR法检测eGFPmRNA表达，Western印迹检测RANK—Fc蛋白表达。HE染色组织学变化及肝脏酶学水平用于肝损伤判断，Western印迹及免疫组织化学方法测定NF．KB的活化程度。c．Jun．氨基末端激酶(JNK)活化水平亦经Western印迹检测。酶联免疫吸附测定法定量检测组织匀浆肿瘤坏死因子(TNF一01)、白细胞介素6(IL-6)水平。细胞凋亡情况由TUNEL法判断

3、。相同时间点各组问比较采用单因素方差分析，两两比较用t检验。结果应用流体力学体内转染方法，RANK—Fc及eGFP在肝脏成功表达。相同时间点RANK-Fc组[ALT(U／L)：1149±109、15744-258、2778±217、4614-65；AST(U／L)：1027±276、1467±236、2208±378、506±160]肝脏酶学水平均较eGFP组[ALT(U／L)：2828±345、5194±944、8403±806、969±147；AST(U／L)：2770±343、4778±684、8050±1160、977l+115]改善(P<0．O1)。

4、与eGFP组相比，RANK—Fc组小鼠肝细胞NF·KBp65(t=6．726)及JNK(t=6．713)表达水平降低，促炎症介质TNF一0【[(235±56)比(527±109)pg／ml，t=4．779]、IL-6『(303±73)比(702±126)pg／ml，t=5．482]水平降低，差异均有统计学意义(均P<0．01)，免疫组织化学检查显示细胞核NF—KB阳性染色细胞数减少，HE染色显示肝组织学病变减轻，TUNEL染色阳性细胞显著减少。结论RANK—Fc对小鼠缺血再灌注损伤具有保护作用，其机制至少通过部分阻断NF．KB介导的炎症反应及JNK介导的促凋亡

5、而实现。【关键词】基因疗法；再灌注损伤；核因子一KB受体活化因子；核因子一．cB受体活化因子配基ProtectivefunctionsofrecombinantproteintargetedatRANKLagainsthepaticischemia／reperfusioninjurytransfectedbyretrovirusnmicesHlJian．LIXiao—hua，SUNBei—chengLINXu—tao．zHANGXing—yuan，zHANGFan，OUKun．CHENQiang-ptaAfiliatedHospital，BinzhouMedi

6、calCollege，ShandongPmvince．Binzhou2566o3。ChinaCorrespondingauthor：CHENQiang-pu，Email：drcqp@263．net【Abstract】ObjecfiveToexploretheprotectivefunctionsofrecombinantproteinRANK—Fcagainsthepaticisehemia／reperfusioniniuryandcl~fyitspossiblemechanism．MethodsSixtymaleBalb／cmicewererandomlyd

7、ividedinto3groupsaccordingtodifferenttreatments：serum-fleemediumcontrol(Sham)group，targetgeneretrovirus(RANK—Fc)groupandemptyvectorretrovirus(eGFP)group．Allmicewereinjectedwith2．5mlsolution(withorwithoutretrovirus)within6secondsviatailvein．After3days，themodelof70％hepaticischemia／rep

8、erfusionwasinducedu