白菜核雄性不育两用系花蕾cDNA文库的构建及雄性不育相关基因的初步筛选

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1、浙江大学硕士学位论文白菜核雄性不育两用系花蕾cDNA文库的构建及雄性不育相关基因的初步筛选姓名：帅琪峰申请学位级别：硕士专业：蔬菜学指导教师：曹家树20040501浙江大学硕士学位论文白菜核雄性不育两用系花蕾eDNA文库的构建及雄性不育相关基因的初步筛选摘要白菜(BrassicacampestrisL．ssp．chinensisMakino；syn．BrapaLssp．chinensis)原产我国，其栽培历史悠久，品种资源丰富，在我国农业生产和人民生活中占有重要地位。作为典型的异花授粉作物，白菜具有明显的

2、杂种优势，其雄性不育系的利用被认为是目前一代杂种生产的理想途径，因而，对白菜雄性不育机理的研究一直深受人们的重视。随着现代生物技术的不断发展，利用分子生物学手段来从分子水平阐明白菜雄性不育发生机理显示出巨大潜力。而建立一个比较完整的cDNA文库，是开展分子生物学研究的基础工作，是分离特定基因，特别是分离高等真核生物基因的有效手段，目的基因的克隆对于研究基因结构，调节机制等方面具有十分重要的意义。本研究以‘矮脚黄’白菜(丑campestrisssp．chinensisvar．communiscv．Aijia

3、ohuang)隐性核雄性不育两用系(A倡line)为材料，从形态上对可育株系和不育株系的植株性状、育性及花器结构进行了比较分析，构建了可育株系花蕾的cDNA文库并对其部分特性进行了鉴定，同时对该文库进行了初步筛选。具体研究结果如下：(1)用比较分析的方法，对白菜核雄性不育两用系中不育株与可育株的植株性状、育性和花器结构等进行形态学观察。结果表明，在幼苗期，白菜核不育两用系不育株与可育株的生长势差异很小；在抽薹开花期，不育株的生长势强于可育株。不育株与可育株的花朵在表型上有明显区别，不育株的花丝短小，花药小

4、而干瘪，其颜色发白，无粉；雌蕊发育正常，有受精能力。可育株花丝发育正常，花药饱满，呈黄色。白菜核雄性不育两用系中不育株花粉败育彻底，不育株与可育株1：1分离，是一种稳定可靠的核雄性不育两用系。(2)以可育株混合花蕾为材料，提取RNA，按照SMARTTMcDNA文库构建试剂盒说明构建了cDNA文库，文库的宿主菌是XLI—Blue。对文库的部分特性进行研究鉴定，结果表明：原初文库的滴度约为8×10’pfu·mL～，扩增文库的滴度约为3×107pfu·mL～；随机挑选50个克隆进行插入片段的检测，电泳结果显示，

5、PCR产物大于500bp的占70％，插入片段平均大小约为760bp；蓝白斑筛选表明，文库的重组率约为87％。(3)以本实验室先前获得的4个白菜核雄性不育相关基因cDNA片段作为混合探针，初步筛选文库，得到了阳性噬菌斑。由此认为白菜花蕾cDNA文库已经建立，摘要为今后进一步分离、研究核雄性不育相关基因奠定了基础。关键词：白菜；BrassicacampestrisBrassicarapa；cDNA文库；核雄性不育克隆；筛库浙江大学硕士学位论文白菜核雄性不育两用系花营eDNA文库的构建及雄性不育相关基因的初步筛

6、选AbstractChinaistheorigincentreofChinesecabbage·pak—choi(BrassicacampestrisL．ssp．chinensisMakino；syn．BrapaL，ssp．chinensis)whichiscultivatedinawiderangeofareaandplaysanimportantroleinfarmingindustry．Chinesecabbage·pak·choiisalsoakindofcropsofobviousheteros

7、is，SomuchattentionhasbeenpaidtotheresearchonmalesterilitymechanismanditsapplicationinChinesecabbagepak-choi．Withthedevelopmentofmodembio·techniques，themolecularbiologyshowslargepotentiality,whichistakenadvantageofexplainingthemolecularmechanismofmalesteri

8、lity．Studiesofgenesrelatedtomalesterilitywillprovideatheoreticalbasisforelucidatingthemechanismofmalesterilityandleadthewaytoapplicationofheterosisbymeansofgeneengineering．ConstructingaeDNAlibraryisthebasisofstudyin