牡丹PsMADS5基因的克隆、表达及载体构建

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1、核农学报2011，25(5)：0939～0944939JournalofNuclearAgriculturalSciences文章编号：1000—8551(2011)05—0939—06牡丹PsMADS5基因的克隆、表达及载体构建任磊王雁周琳彭镇华(中国林业科学研究院林业研究所／国家林业局林木培育重点实验室，北京100091)摘要：以牡丹品种赵粉(PaeoniasuffruticosaL．CV．ZhaoFen)为试材，采用RT，PCR和RACE法从花瓣中获得了1个牡丹SEPA基因cDNA，命名为PsMADS5，

2、GenBank登录号为HQ449569。其cDNA全长1222bp，包含190bp的5非编码区、302bp的3非编码区和1个长度为732bp编码243个氨基酸的开放阅读框。序列比对和系统进化分析表明，PsMADS5与葡萄的亲缘关系最近，相似性达83％以上，属于MADS家族．s亚家族。相对荧光定量PCR分析表明，PsMADS5在花瓣中的表达量最高，其次是心皮，再次是萼片，在雄蕊中表达量最低。成功构建正义和反义表达载体，为牡丹花型改良和品种创新提供基础。关键词：牡丹；基因克隆；表达；载体构建CLONING，EXPR

3、ESSIONANDVECTORCONSTRUCTIONOFPsMADS5GENEINTREEPEONYRENLeiWANGYanZH0ULinPENGZhen．hua(KeyLaboratoryofTreeBreedingandCultivation，StateForestryAdministration，ResearchInstituteofForestry，CAF，Beng100091)Abstract：Inthiswork，afull—lengthcDNAsequenceofSEPALATAgenewas

4、obtainedfrompetalsoftreepeony(PaeoniasufruticosaL．CV．ZhaoFen)usingRT—PCRandRACE，namedPsMADS5(GenBankaccessionNo．HQ449569)．ThefulllengthofPsMADS5cDNAis1222bpinlength，containinga5，-untranslatedregion(5，_UTR)of190bp，a3，_UTRof302bp，andanopeningreadingframe(ORF)o

5、f732bpencodinga243predictedaminoacids．Subsequently，sequencecomparisonandphylogeneticanalysisrevealedthatPsMADS5sharedmorethan83％homologywithVitisvinefera，belongedtoSEPsub．familyofMADSfamily．However，relativereal—timePCRanalysisindicatedthatPsMADS5showedthehig

6、hesttranscriptabundanceinpetals，moderatelevelsincarpels，lowlevelsinsepalsandthelowestlevelsinstamens．Constructionofsenseandantisenseplantexpressionvectorlaidafoundationforflowertypemodificationandvarietyinnovation．Keywords：treepeony；genecloning；expression；co

7、nstructionofvectorMADS—box基因是一类广泛存在于植物中序列特鱼草(Antirrhinummajus)花同源异型突变体的研究，先异的同源异型基因。它所编码的蛋白质是一种转录因后提出花器官发育的ABC模型、ABCD模型、ABCDE子，通过调节其他基因的转录来发挥其调控作用。模型和四因子模型。MADS．box基因在植物生长发育过程中起着非常重要随着对花发育遗传学研究的不断深入，发现拟南的作用，不仅能够调控植物的营养生长，而且参与根、芥中的sEPAl／2／3／4(SEP1／2／3／4，即以前的茎

8、、叶、胚珠及果实发育’。参与花器官形成的基因AGL2，4，9和3)基因对于花器官的形成不可或缺，并大都属于MADS—box基因。前人基于对模式植物拟南称它们为E类功能基因。该类基因与B、c组基因一芥(Arabidopisthaliana)、矮牵牛(Petuniahybrida)和金起形成复合转录因子，激活或抑制靶基因的转录和表收稿日期：2010-12—13接受日期：2011-03—16