肌卫星细胞修复短跑运动员肌肉损伤动物模型研究

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1、分类号Ｇ８０６学校代码．．．１０２３３密级１０２３３５０３６．公开学号．．．．．．．．．．戀扭舟０评花学艮硕士研究生学位论文题目：肌卫星细胞修复短跑运动员肌肉损伤动物模型研究学科门类：教育学一级学科：体育学二级学科：体育教育训练学研究方向：运动损伤修复研究生：文河保指导教师：孙月舟教授、关伟军教授答辩日期：２０１８年６月９日中文摘要常见的运动员肌肉损伤主要分为肌肉组织的扭伤、拉伤和挫伤三种。肌肉损伤在短跑运动中发病率最高，肌肉损伤居短跑运动员损伤

2、之首，严重影响运动员机能水平、运动能力和运动成绩。研究肌肉损伤的修复治疗成为临床医学和运动医学的热门方向。现阶段，修复治疗受损肌肉惯用的方法有药物治疗、手术治疗、中医针灸推拿、物理疗法等。经过临床验证，以上疗法对肌肉损伤有一定的疗效，但治疗周期长、易产生瘢痕、降低肌肉功能。干细胞在人体生长发育和受损组织再生修复中起着至关重要的作用，国家“十二五”时期，干细胞治疗运动损伤的相关研究突飞猛进，硕果累累，国家“十三五”又将干细胞研究纳入规划中，体育和医学领域对干细胞疗法的未来信心十足。本研究旨在体外分离培养

3、肌卫星细胞，建立肌卫星细胞扩增培养体系，并对肌卫星细胞的增殖、分化等生物学特性进行检测，设计动物肌肉损伤模型，注射肌卫星细胞进行干预，检测移植后的干细胞在体内迁移和修复情况，获得实验结果如下：1.运用机械分离法、Ⅰ型胶原酶和胰酶联合消化法分离胎羊胫骨前肌来源的肌卫星细胞，获得的细胞通过差速分选法纯化并培养至31代，经冻存复苏后，细胞仍拥有较高的活率；通过RT-PCR、流式细胞术和免疫荧光对体外增殖的干细胞进行表面特异性标记物鉴定，结果显示：细胞对MYOG、MYF5、PCNA、C-MET、desmin等

4、基因均表达较高的阳性率，表明分离筛选后的细胞具有肌卫星细胞的特征。2.对培养的细胞进行“干性”（stemness）研究。根据细胞扩增特点检测克隆形成能力以及绘制生长曲线，并使用含有不同因子的培养基诱导肌卫星细胞向成脂细胞、成骨细胞、成软骨细胞、成肌细胞分化，对分化的细胞用RT-PCR技术和免疫组织化学技术检测相关基因的表达，检测结果均为阳性。表明所分离的细胞符合干细胞的相关特征，为肌卫星细胞。3.利用心脏毒素（Cytotoxin，CTX）建立小鼠肌肉损伤模型，制作石蜡病理切片染色后观察，发现大部分正常

5、肌肉组织结构受损，血清学检测发现小鼠血液中肌酸激酶（CK）明显高于正常范围。用CM-Dil细胞示踪剂标记培养的肌卫星I细胞后，将其直接注射到小鼠肌肉损伤部位，设定7个时间梯度，每个梯度均取组织和血液样品做石蜡病理切片、冰冻切片和血清学检测。研究结果表明移植的干细胞对肌肉损伤有较好的修复作用。综上所述，本研究分析了短跑运动员肌肉损伤和干细胞研究进展，并在体外成功分离培养了肌卫星细胞，并对其“干性”进行了验证，利用肌卫星细胞修复小鼠肌肉损伤，为干细胞促进组织再生修复提供理论基础以及为干细胞治疗运动损伤从而

6、更好的应用于临床研究提供实验依据。关键词：肌卫星细胞；短跑；多分化潜能；肌肉损伤；干细胞治疗IIAbstractThecommonmuscleinjuryofathletesismainlydividedintothreekindsofmuscletissuesprain,pullandcontusion.Muscleinjuryhasahighincidenceinsprint,andmuscleinjuryisthefirstinjuryofsprinters,whichseriouslyaffe

7、ctsathletes'functionallevel,athleticabilityandathleticperformance.Researchonrepairandtreatmentofmuscleinjuryhasbecomeapopulartrendinclinicalmedicineandsportsmedicine.Atthisstage,therearemanywaystorepairdamagedmuscles,suchasdrugtherapy,surgicaltreatment,

8、acupunctureandmassage,physicaltherapy,etc.Afterclinicalverification,theabovetreatmenthasacertaineffectonmuscleinjury,butthetreatmentcycleislong,itiseasytoproducescarandreducemusclefunction.Stemcellsinhumangrowthanddevelopmentandp