芳香烃受体相关的色氨酸代谢及检测方法研究

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1、密级：论文编号：中国农业科学院学位论文芳香烃受体相关的色氨酸代谢及检测方法研究ＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆＴｒｙｐｔｏｐｈａｎＭｅｔａｂｏｌｉｔｅｓＲｅｌｅｖａｎｔｔｏＡｒｌｙＨｙｄｒｏｃａｒｂｏｎＲｅｃｅｐｔｏｒａｎｄｔｈｅｉｒＤｅｔｅｃｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄｓ硕士研究生：刘悦指导教师：陈刚研究员申请学位类别：农业推广硕士专业领域名称：食品加工与安全培养单位：农业质量标准与检测技术研究所研究生院２０１８年５月密级:论文编号:中国农业科

2、学院学位论文芳香烃受体相关的色氨酸代谢及检测方法研究InvestigationofTryptophanMetabolitesRelevanttoArylHydrocarbonReceptorandtheirDetectionMethods硕士研究生：刘悦指导教师：陈刚研究员申请学位类别：农业推广硕士专业领域名称：食品加工与安全培养单位：农业质量标准与检测技术研究所研究生院2018年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationInvest

3、igationofTryptophanMetabolitesRelevanttoArylHydrocarbonReceptorandtheirDetectionMethodsM.S.Candidate：YueLiuSupervisor：ProfessorGangChenDegree：MasterofAgriculturalExtensionSpecialty:FoodProcessingandSafetyMay2018独创性声明中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目芳香烃受体配体合

4、成关键酶的研究食口加工与安研究：品质口农产！ｆｔ与食物安论文作者刘悦专业全方向全胃指导教师陈刚培养单位（研究所、中心）技术研究所姓名职称单位专业签名輝＾如Ｈ；—人硕导口ｍ〇北京市衣林科学院衣业觀露工－娜仰？硕导“农产品质量＾＾＾王纪华研九贝标准与检騰术研究中心主博导□安全＾席＼Ｉ＿耕教授中国农业大学分析化学张立国研究员中国科学院生物物理所分子生物学答漂辩胡树文教授中国农业大学环境科学１

5、委沈红教授北京农学院基础兽医学＾员方美英教授中国农业大学动物遗传育种温童朝阳研究员解放军防化研究院生物化学ｇ雰３会议记录（秘书）４４论文答辩时间地点８年５月２４日农业质量标准与检测技术研宄所２０１会议室２０１摘要色氨酸(Tryptophan，Trp)是人体必需的8种氨基酸之一，为蛋白质营养价值评价的重要指标。色氨酸代谢物对人体的情绪、新陈代谢、细胞生长发育、生物节律的形成及免疫功能等均具有重要的调节作用。6-甲酰基吲哚并3-2-b咔唑（6-formylindole[3,2

6、-b]carbazole，FICZ）是色氨酸的光解产物，也可由吲哚丙酮酸避光孵育产生。FICZ在纳摩尔级别即可诱导芳香烃受体（AHR）及其下游基因高表达，诱导Th17细胞的分化，正向调控免疫反应，这表明FICZ对提高机体免疫能力及预防、控制肿瘤具有特殊意义。然而，目前没有直接证据表明FICZ可在体内被合成。因此，找到人体中能够代谢色氨酸产生内源性FICZ的关键酶至关重要。L-氨基酸氧化酶（L-aminoacidoxidase，LAAO）是代谢色氨酸产生吲哚丙酮酸的关键酶，其人源表达基因为IL4i1。因此，本文以研

7、究人源LAAO酶是否为催化色氨酸产生FICZ的关键酶为出发点，通过非靶向及靶向代谢组学技术，对过表达IL4i1的293t细胞代谢色氨酸产生的AHR配体进行了定性及定量分析。主要实验内容及结果：1.构建瞬时和稳定转染IL4i1基因的293t细胞，用蛋白分子免疫印迹实验对细胞上清液及细胞裂解液中的LAAO酶的表达进行检测，同时依据鲁米诺发光反应原理评估LAAO酶活。实验结果表明，人源IL4i1基因表达的LAAO酶在胞内表达，也能分泌到胞外，属分泌型蛋白；LAAO酶在37℃，pH为5.5时可高效催化色氨酸，转化率约为2

8、.2%。2.检测细胞上清诱导AHR报告细胞系荧光素酶表达量，用以反映LAAO酶代谢色氨酸产生AHR配体的水平。色氨酸经LAAO酶催化氧化之后，诱导荧光素酶表达的能力显著增加，表明LAAO酶的催化产物至少有一种为AHR的强激动剂。3.建立FICZ、吲哚甲醛、吲哚乙酸、色氨酸、犬尿氨酸、犬尿酸的超高效液相色谱串联质谱检测方法，各检测物线性范围广，线性相关系数均为0.999，定