植化方法学 沈阳药科大学天然药物化学教研室

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1、植化方法学(一)天然药物化学教研室邱峰2010年3月植化方法学涉及内容药材提取物单体化合物结构鉴定分离化学及波谱学提取如何开展研究-注意点查阅文献，了解研究现状1）、同种同属植物的相关文献2）、某类成分的相关文献根据不同目的，确定实验方案1）、化学成分系统研究2）、某类化学成分的分离3）、某种已知化学成分的分离4）、活性成分的追踪分离预试或小试1）、含有化学成分性质和类别2）、为放大试验而进行的小试植化方法学（一）（各种色谱的分离原理及操作）一、硅胶相关色谱二、氧化铝相关色谱三、聚酰胺柱色谱四、葡聚糖凝胶柱色谱五、大孔吸附柱色谱六、离

2、子交换柱色谱七、反应薄层色谱八、提取方法一、硅胶相关色谱1、硅胶的结构(SiO2.XH2O)O—Si—O—Si—OHOOOO植化方法学（一）（各种色谱的分离原理及操作）一、硅胶相关色谱二、氧化铝相关色谱三、聚酰胺柱色谱四、葡聚糖凝胶柱色谱五、大孔吸附柱色谱六、离子交换柱色谱七、反应薄层色谱八、提取方法2、分离原理吸附作用：氢键作用、偶极作用和静电作用等吸附强度的大小取决于硅醇基类型、硅醇基数目（比表面积）、孔体积、平均孔径3、使用范围由于硅胶的弱酸性、往往适合于分离黄酮、香豆素、蒽醌、萜、甾体等中性或弱酸性类化合物。黄连生物碱的化学结

3、构薄层板：硅胶G薄层板，110C活化1小时展开剂：乙酸乙酯-氯仿-甲醇-浓氨水-二乙胺（8:2:2:1:0.5）检测方式：UV366nm黄连生物碱硅胶薄层色谱图谱4、常用硅胶的规格100~140目、100~200目（75~150m）、200~300目（45~75m）为开放柱色谱用硅胶10~40m为薄层色谱用硅胶2~10m为高效薄层色谱或液相色谱用硅胶5、薄层色谱硅胶的种类硅胶G:含有石膏12~14%，粒度10~40m，pH6~7(10%)。硅胶H:不含石膏，pH6~7(10%)。硅胶GF254:含有石膏12~14%，pH6

4、~7(10%)，且含有少量的荧光剂。6、硅胶含水量与活性之间的关系细玻璃管法测定硅胶活性展开剂：苯7、含水硅胶色谱硅胶含水达17%以上为分配色谱，适宜分离生物碱、糖类、皂苷、有机酸等。表现在薄层和开放柱上，展开剂或洗脱剂为多相含水系统。薄层板：硅胶H展开剂：I:正丁醇-乙酸乙酯-水（4:1:1）II:氯仿-甲醇-水（65:35:10）下层显色：10%硫酸Oleanane-typeandProtopanaxatriol-typeSaponinsfromPanaxginsengPanaxadiol-typeSaponinsfromPana

5、xginseng8、硅胶制备薄层色谱操作方法1)、薄层的制备2020cm2的玻璃板一般所用硅胶量为8~20g，5‰CMCNa的用量按1:2~2.5为宜，晾干，根据需要可进行活化。2)、点样（10~50mg）用玻璃毛细管或移液管将样品溶液线形点样于硅胶板上，点样线宽度要适宜，过窄易超载，过宽影响分离效果。3)、展开晾干点样处溶剂后，以选好的展开剂进行展开，对有些化合物预饱和一段时间，分离效果更好。原点前沿4)、标记色带取出薄层板，晾干，根据荧光画出色带，或部分显色确定色带的位置。5)、剥离、提取剥离色带部分的硅胶，以合适的溶剂直接提取

6、或装入小玻璃柱进行洗脱。（忌用含水系统处理）6)、浓缩浓缩提取液或洗脱液得色带对应的化合物。多数情况下，需要进一步的精制或纯化处理。8、制备薄层色谱操作原点前沿制备薄层色谱展开后处理9、硅胶柱色谱的操作（开放柱色谱）1)、拌样（干法上样）：将分离样品溶于易挥散溶剂中，与三倍量的柱层析硅胶拌样。滴加样品溶液的同时应不断搅拌均匀，一旦达到制剂软材程度应停止滴加样品溶液，晾干或低温干燥（注意有毒溶剂的处理）后再继续操作，直到样品溶液全部加入。2)、装柱：将拌样硅胶10~20倍量的柱色谱硅胶浸泡于起始溶剂中，搅拌赶出气泡，装入准备好的玻璃柱中

7、，平衡至不再下降为止。3)、上样：待硅胶柱平衡好后，将干燥好的拌样硅胶用漏斗加入柱子上部（加入前要保证起始溶剂在柱子中足够的高度以免带入气泡）。4)、加入保护硅胶或棉花：用起始溶剂洗脱至柱中上端溶剂颜色变浅或无色为止，然后加入适量硅胶或棉花起缓冲作用。5)、柱色谱洗脱剂的选择起始溶剂原则上对被分离样品中的任何物质都没有洗脱能力。洗脱溶剂的选择以硅胶薄层板的色谱行为为先导，被分离成分的Rf值一般在0.1~0.2为宜（理论上为0.2~0.3）。“注”：展开剂和洗脱剂的选择最好参考文献资料。6)、更换洗脱剂在一个洗脱剂系统下，一般要求至少洗

8、脱3~5个保留体积，实验中可根据具体情况决定是否更换，比如到5个保留体积还有较大量的的物质被洗脱下来，就应当继续洗脱下去。7)、保留体积的估算浸泡硅胶的溶剂量+空柱溶剂量–柱床上端溶剂量=保留体积8)、流速的提高：柱上端