单侧输尿管梗阻大鼠肾脏TGFβ受体亚型表达的变化

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1、单侧输尿管梗阻大鼠肾脏TGF—p受体亚型表达的变化硕士研究生：指导教师：指导小组：专业名称：沈楠林洪丽教授谢华内科学摘要目的：探讨转化生长因子．B(TGF．p)I型受体、II型受体以及下游Smad蛋白在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型肾脏中表达及意义。方法：90只雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组(CON组)、假手术组(SOR组)和单侧输尿管梗阻组(UUO组)，分别于术后1d、3d、7d、14d、2ld处死，观察各组大鼠肾功能变化；PAS染色观察大鼠肾间质病理形态改变；采用定时定量PCR基因芯片分析正常大鼠和不同分期肾间质纤维化大鼠肾组织TG

2、F．Dr、l，II型受体亚型表达，观察其丰度变化，结合肾组织的病理改变，筛选出有病理生理意义的TGF．DI，II型受体亚型。进一步应用Real．timePCR，Westernblot，和免疫荧光检测筛选出的TGF．D受体亚型mRNA和蛋白在肾间质纤维化大鼠肾组织的分布和表达。结果：随时间延长，UUO组大鼠的血肌酐，血尿素氮与CON组比较均于术后第7天出现升高，并随梗阻时间延长逐渐增加，于2l天达到最高峰(P<0．01)。肾组织病理PAS染色可见UUO组肾脏随梗阻时间延长，肾小管萎缩、扩张、炎细胞浸润加重；基因芯片结果显示：与对照组相比，输尿管梗阻

3、组肾组织TGF．BI型受体ALK．5、ALK．6、ALK一7、TGF-pII型受体TGFl3RII，Smad2／3、P．Smad2／3的mRNA表达出现显著变化。Real．timePCR结果：ALK．5，ALK．7，TGFl3RII的mRNA表达于术后第3d出现上升并随梗阻时间延长逐渐增加(P<0．05)，于14天达到最高峰(P<0．01)，在第2l天有所回落。蛋白水平检测：ALK．5、ALK．7、TGFBRII蛋白水平表达与基因水平表达一致。ALK．6蛋白水平表达于术后第3d即出现下降并随梗阻时间延长逐渐减少(P<0．05)，于14天达到最低峰

4、(P<0．01)，在第2l天有所回升。Smad2／3、P．Smad2／3蛋白表达于术后第3d出现上升并随梗阻时间延长逐渐增加(P<0．05)，于14天达到最高峰(P<0．01)，在第21天有所回落。免疫荧光结果显示ALK-5、ALK-6、ALK．7、TGFBRII蛋白在CON组中主要分布在肾小管及肾间质，肾小球内基本无表达。在UUO组，ALK．5、ALK．7、TGFflRII、Smad2／3、TGF[3RII蛋白表达随着梗阻时间延长呈进行性上升(P<0．05)，于l4天达到最高峰(P<0．01)，在第21天有所回落。ALK．6蛋白表达呈进行性下降

5、(P<0．05)，于14天达到最低(P<0．01)，在第2l天有所回升。结论：在肾间质纤维化进展中TGF．p受体亚型ALK-5、ALK一7、TGFl3RII表达升高，ALK．6表达下降，具有时空一致的相关性。关键词转化生长因子受体Smads输尿管梗阻肾间质纤维化2ExpressionsofsubtypesofTGF—BreceptorsinratswithunilateralureteralobstructionMasterdegreecandidate：ShennanSupervisor：ProfessorLinHongLiMajor：Inte

6、rnalMedicineAbstractObjective：ToinvestigatetheexpressivechangesofthesubtypesofTGF．Dreceptors(ALK．5，ALK-6，ALK一7，TGFpR—II)intherenalinterstitialfibrosisinducedbyunilateralureteralobstruction(uuo)．Methods：Ratsweredividedrandomlyintothreegroups，i．e，normalcontrol(CON)，shamoperatio

7、n(SOR)andUUOgroups，andsacrificedatpostoperativedayl，3，7，14and21．Firstly，weUSeRealtime-PCRArraystodetectthemRNAsexpressionsofTGHBR-I’SandTGFIBR—II’Ssubtypesandselectedthecandidatesubtypeswhichweresignificantlychangedamongthethreegroups，thatisALK一5，ALK一6，ALK-7andTGFIBR·II，thenw

8、efurtherdetectedandconfirmedtheexpressionchangesofabove—mentionedTGF